Cтраница 1
Биоспецифические сорбенты ( БСС) образуются в результате закрепления на поверхности носителя веществ ( лигандов) с определенной биохимической специфичностью. Связанный с носителем лиганд сохраняет, по крайней мере частично, способность к взаимодействию со строго определенными веществами. Результатом этого взаимодействия является адсорбция веществ на БСС. Адсорбция имеет обратимый характер: вещество можно десорбировать посредством изменения ионной силы раствора или же специфическими элюентами. [1]
О применении полиакриламидных гелей для получения биоспецифических сорбентов см. в разд. [2]
Успехи метода аффинной хроматографии связаны с созданием биоспецифических сорбентов, способных связывать находящиеся в растворе вещества на основе взаимодействия фермент - субстрат, фермент-ингибитор, антиген-антитело. Подавление сорбционных свойств биоспецифических сорбентов ( инактивация активных центров) часто наблюдается при выделении веществ из экстрактов или культуральных жидкостей без предварительной очистки. В связи с этим основные успехи аффинной хроматографии относятся к препаративным лабораторным процессам выделения белков, в том числе ферментов, после использования предварительных стадий их очистки. Масштабирование этих процессов и многократное использование биоспецифических сорбентов, особенно при работе с многокомпонентными растворами, в связи с изложенными причинами часто встречает определенные затруднения. [3]
Привитые аминогруппы могут быть использованы для проведения на поверхности силохрома дальнейшего синтеза сложных: органических соединений и получения биоспецифических сорбентов. [4]
Успехи метода аффинной хроматографии связаны с созданием биоспецифических сорбентов, способных связывать находящиеся в растворе вещества на основе взаимодействия фермент - субстрат, фермент-ингибитор, антиген-антитело. Подавление сорбционных свойств биоспецифических сорбентов ( инактивация активных центров) часто наблюдается при выделении веществ из экстрактов или культуральных жидкостей без предварительной очистки. В связи с этим основные успехи аффинной хроматографии относятся к препаративным лабораторным процессам выделения белков, в том числе ферментов, после использования предварительных стадий их очистки. Масштабирование этих процессов и многократное использование биоспецифических сорбентов, особенно при работе с многокомпонентными растворами, в связи с изложенными причинами часто встречает определенные затруднения. [5]
Применение поперечносшитых агарозных гелей в общем аналогично применению таких же гелей с водородными мостиками ( см. разд. Преимущества сшитых гелей, наиболее полно выявляются при использовании их для получения биоспецифических сорбентов для аффинной хроматографии ( см. носители Affi-Gel, разд. [6]
В справочнике с наибольшей полнотой приведены вырабаты-ваемые промышленностью многих стран мира неорганические и органические сорбенты, носители, жидкие фазы и другие материалы для всех видов хроматографии - всего приблизительно 6000 марок и сортов. Описаны новые классы материалов для хроматографии: поверхностно-пористые сорбенты и носители, сорбенты с привитыми фазами ( типа щеток), биоспецифические сорбенты для аффинной хроматографии. [7]
Стекла с контролируемым размером пор были введены в хроматографическую пратику в 1965 г. ( Н а 1 1 е г W. Их применяют для ГПХ ( в водных растворах) белков, вирусов, углеводов, компонентов нуклеиновых кислот; фракционирования ( в органических растворителях) синтетических полимеров, а также в качестве инертных носителей для жидкостной распределительной хроматографии и ГДХ и носителей биоспецифических сорбентов для аффинной хроматографии ( см. разд. [8]
Это соединение, будучи привязанным к се-фарозе, использовано Гендерсоном и др. [18], а также Якубовским и Павелкевичем [21] в качестве сорбента для гидрофобной хроматографии аминоацил-т РНК-синтетаз и L-гистидинолфосфат-аминотрансфераз. Торая и др. [40] предложили его в качестве биоспецифического сорбента для аминооксидазы из Aspergillus niger, в то же время Восбек и др. [44], выделяя с помощью того же сорбента аминопептидазы из Streptomyces griseus, не пришли к определенному заключению о типе связи, образующейся при специфической сорбции. [9]
Сорбенты на основе пористого стекла с привитыми углеводами ( CPQ / Qly-cophase, CPG / Dextran) предназначены для ГПХ высокомолекулярных веществ в водных растворах и других полярных растворителях. Мономолекулярный слой декстрана имитирует поверхность мягких гелей на углеводной основе - сефадексов и агароз. Сорбенты с модифицированной гидрофильной поверхностью могут быть использованы также в качестве носителей биоспецифических сорбентов для аффинной хроматографии ( см. разд. Пористые стекла устойчивы к действию кислот ( кроме фтористоводородной) и органических растворителей, выдерживают термическую стерилизацию, однако продолжительное использование при рН 9 и температуре выше 30 С не рекомендуется из-за возрастающей растворимости стекла в воде. Под воздействием сильных окислителей глицериловые группы привитых фаз могут превращаться в соответствующие альдегиды. [10]
Развитие аффинной хроматографии сопровождается увеличением количества продажных иммобилизованных аффинных лигандов. Можно полагать, что то же ожидает и другие хроматографические материалы. Точно так же как сегодня в очень редких лабораториях готовят ДЭАЭ - и КМ-целлюлозу, совершенно закономерно, что будет постепенно увеличиваться использование продажных биоспецифических сорбентов. Это справедливо прежде всего для сорбентов с групповой специфичностью или сорбентов специфических к веществам, постоянно получаемым в лабораториях, и обусловлено специфической природой аффинной хроматографии. Из разнообразия биологически активных веществ следует, что необходим очень широкий ассортимент специфических сорбентов; поэтому много научных работников, по-видимому, будут вынуждены сами готовить специальные высокоэффективные сорбенты. [11]
Успехи метода аффинной хроматографии связаны с созданием биоспецифических сорбентов, способных связывать находящиеся в растворе вещества на основе взаимодействия фермент - субстрат, фермент-ингибитор, антиген-антитело. Подавление сорбционных свойств биоспецифических сорбентов ( инактивация активных центров) часто наблюдается при выделении веществ из экстрактов или культуральных жидкостей без предварительной очистки. В связи с этим основные успехи аффинной хроматографии относятся к препаративным лабораторным процессам выделения белков, в том числе ферментов, после использования предварительных стадий их очистки. Масштабирование этих процессов и многократное использование биоспецифических сорбентов, особенно при работе с многокомпонентными растворами, в связи с изложенными причинами часто встречает определенные затруднения. [12]
Однако вопрос их практического использования в больших, масштабах не решен еще с экономической точки зрения. Напротив, разработка таких носителей, как стекло и керамические материалы, более целесообразна именно для практического использования. К их недостаткам относятся относительно высокая неспецифическая сорбция, а также чувствительность к щелочному гидролизу. Однако соответствующая модификация или обработка поверхности в значительной степени позволяет преодолеть эти недостатки. Ввиду того что целлюлоза является одним из наиболее дешевых носителей, она большей частью используется экспериментаторами, интересующимися практическими приложениями. Биоспецифические сорбенты, основанные на целлюлозе, в отличие от других сорбентов очень часто обнаруживают отклонение от поведения, ожидаемого на основании степени замещения. [13]