Флуоресцентный спектрофотометр
Cтраница 1
Флуоресцентный спектрофотометр отличается от флуорометра с фильтрами тем, что фильтры в нем заменены моно-хроматорами призменного или решетчатого типа. Для аналитических целей флуоресцентный спектрофотометр имеет преимущества перед фильтрующим флуорометром в отношении избирательности длины волны, возможности быстрого приспособления к условиям опыта и удобства пользования. [1]
В флуоресцентных спектрофотометрах часто используется ксеноновая дуговая лампа высокого давления, поскольку она достаточно равномерно излучает энергию от ультрафиолетовой до инфракрасной области спектра. [2]
Во флуоресцентных спектрофотометрах монохроматоры имеют щель. Узкая щель обеспечивает высокое разрешение и спектральную чистоту, большая щель - высокую интенсивность. Выбор ширины щели определяется разницей в длине волны возбуждающего и испускаемого излучения, а также требуемой степенью чувствительности. [3]
Флуорометры и флуоресцентные спектрофотометры надо ежедневно стандартизовать по стабильному флуорофору для обеспечения правильной воспроизводимости ответа. Изменения обусловлены факторами, связанными с самим прибором, такими, как различия в интенсивности - лашш и чувствительности фотоумножителя. Флуорофором может служить чистый образец флуоресцирующего вещества, подвергаемого анализу, или другое легко очищаемое флуоресцирующее вещество с полосами поглощения флуоресценции такими же, что и у испытуемого вещества. Подходящим флуорофором для голубой флуоресценции является хинин в разведенной серной кислоте, для зеленой флуоресценции - флуоресцеин натрий и для красной - родамин. [4]
Шкалу длин волн флуоресцентного спектрофотометра следует периодически калибровать. [5]
Во флуорометрах и флуоресцентных спектрофотометрах используются различные источники излучения. Ртутные лампы относительно стабильны и излучают энергию в основном при дискретных длинах волн. [6]
 |
Схема флуоресцентного спектрофотометра. [7] |
Монохроматоры, применяющиеся во флуоресцентных спектрофотометрах, должны иметь высокие яркость и разрешение. [8]
Для измерения флуоресценции используют специально предназначенные для этой цели флуоресцентные спектрофотометры, позволяющие с помощью монохроматоров задавать длины волн для возбуждающего и испускаемого света. Испускаемый флуорофором свет обычно регистрируют под углом 90 к падающему свету. [9]
Флуоресцентный спектрофотометр отличается от флуорометра с фильтрами тем, что фильтры в нем заменены моно-хроматорами призменного или решетчатого типа. Для аналитических целей флуоресцентный спектрофотометр имеет преимущества перед фильтрующим флуорометром в отношении избирательности длины волны, возможности быстрого приспособления к условиям опыта и удобства пользования. [10]
Многие флуоресцирующие вещества светочувствительны. Будучи помещены во флуоресцентный спектрофотометр, они могут подвергаться фотохимическому разложению на более или менее флуоресцирующие продукты. Такой эффект можно обнаружить путем наблюдения показаний детектора во времени и снизить его, уменьшив интенсивность источника света с помощью фильтров или экранов. [11]
Комплектные спектрофлуориметры с двумя монохромато-рами, из которых один служит для возбуждения флуоресценции лучистым потоком переменной длины волны, а второй - для спектрального разложения излучения флуоресценции, выпускают некоторые фирмы США. Таковы Аминко-Боумен спект-рофотофлуорометр ( Америкен Инструменте Компани), диф-фракционный прибор с ксеноновой лампой, снабженный приставками для термостатирования испытуемых растворов и твердых веществ, для работы в инфракрасной области и для измерения фосфоресценции в отраженном свете при низких температурах ( до - 114 С); флуоресцентный спектрофотометр Флуо-риспек типа СФ-1 ( Байрд Этомик Инкорпорейшн) с двойными диффракционными монохроматорами; спектрофлуорометр ( Фэр-ренд Оптикел Компани) с ксеноновым осветителем и регистрирующей приставкой, позволяющий производить измерения в объемах жидкости от 0 2 до 10 мл. К обычным спектрофотометрам большинство зарубежных фирм ( в частности Бекман, Перкин-Эльмер, США; Карл Цейсе, ФРГ) выпускает специальные приставки для проведения флуоресцентных измерений. [12]
Для этого гранулы носителя включают в 20 % - ную желатину. Частицы геля выдерживают 5 ч при 37 С в растворе желатины, затем смесь переносят в подходящий для этих целей небольшой контейнер и оставляют на несколько часов в холодильнике. Желатиновые блоки замерзают, их режут микротомом на образцы толщиной 10 мкм. Полученные срезы наносят на предметные стекла и покрывают тонкими покровными стеклами для предохранения от высыхания. С помощью флуоресцентного спектрофотометра записывают спектры поглощения и излучения флуоресцеинизотиоцианата меченной флуоресцеином аминопептидазы, как свободной, так и связанной с ага-розным или декстрано вым носителем. [13]
Страницы: 1