Обычный спектрофотометр

Cтраница 4

Комплектные спектрофлуориметры с двумя монохромато-рами, из которых один служит для возбуждения флуоресценции лучистым потоком переменной длины волны, а второй - для спектрального разложения излучения флуоресценции, выпускают некоторые фирмы США. Таковы Аминко-Боумен спект-рофотофлуорометр ( Америкен Инструменте Компани), диф-фракционный прибор с ксеноновой лампой, снабженный приставками для термостатирования испытуемых растворов и твердых веществ, для работы в инфракрасной области и для измерения фосфоресценции в отраженном свете при низких температурах ( до - 114 С); флуоресцентный спектрофотометр Флуо-риспек типа СФ-1 ( Байрд Этомик Инкорпорейшн) с двойными диффракционными монохроматорами; спектрофлуорометр ( Фэр-ренд Оптикел Компани) с ксеноновым осветителем и регистрирующей приставкой, позволяющий производить измерения в объемах жидкости от 0 2 до 10 мл. К обычным спектрофотометрам большинство зарубежных фирм ( в частности Бекман, Перкин-Эльмер, США; Карл Цейсе, ФРГ) выпускает специальные приставки для проведения флуоресцентных измерений. [46]

Влияние ширины полосы пропускания на спектры идентичных растворов. Следует обратить внимание на то, что оптическая плотность, меняется от спектра к спектру на 0 1. [47]

Интенсивность рассеянного излучения в высококачественных приборах не превышает нескольких десятых процента во всем интервале длин волн; в обычных условиях она не оказывает заметного влияния на величину оптической плотности. Однако, если измерения проводят при длинах волн, экстремальных для данного прибора, рассеянное излучение может внести заметную ошибку. Так, обычный спектрофотометр для измерений в видимой области снабжен стеклянной оптикой и кюветами; стекло начинает поглощать в области 350 - 400 нм. Кроме того, в таких приборах используют фотоумножители или фотоэлементы с максимумом электрического сигнала в интервале 500 - 700 нм; при 350 нм сигнал может составлять всего 10 % ( или меньше) максимального. Наконец, в приборах такого типа источником служит вольфрамовая нить, максимум энергии которой соответствует длинноволновой области видимого излучения; при 350 нм излучение составляет лишь часть максимального. Эти три фактора лимитируют применение прибора в коротковолновой области; чтобы получить значение оптической плотности в этой области, необходимо проводить измерения при максимальном усилении детекторного сигнала, максимальной интенсивности источника и с относительно-широкой щелью. [48]

Анализ при помощи. [49]

В принципе количественные измерения должны основываться на интегральной площади, ограниченной кривой поглощения в области линии поглощения и основной линией. Однако на практике это часто невыполнимо вследствие чрезмерного наложения соседних линий; поэтому при расчетах используют высоту максимума. Такая аппроксимация редко приводит к значительным погрешностям, поскольку большинство линий поглощения при регистрации их на обычном спектрофотометре выглядит как очень узкий пик. [50]

Этот способ определения температуры молекулярного плавления ДНК основан на свойствах формальдегида взаимодействовать с 1Ш2 - группами азотистых оснований, которые освобождаются в результате тепловой денатурации ДНК, и тем самым препятствовать обратному соединению разделившихся цепей ДНК. Формальдегид как бы фиксирует изменения в молекуле ДНК, вызванные нагреванием, поэтому и после охлаждения раствора эти изменения можно установить с помощью обычного спектрофотометра СФ-4 без термостатированной приставки. [51]

При работе по первому методу используются линии резонансного триплета 403 1, 403 3 и 403 4 ммк, неразрешаемые в обычно используемых спектрофотометрах. Открываемый минимум составляет около 0 08 - 0 1 мкг / мл Мп при использовании воздушно-ацетиленового пламени и работе с моно-хроматором, фотоумножителем и зеркальным гальванометром, а также при работе с обычными спектрофотометрами. [52]

Предварительно подбирают оптимальную длину волны ( или светофильтр) и проводят установку на нуль. Затем после добавления из бюретки каждой порции титранта проводят фотометрическое измерение. В конструкцию обычных спектрофотометров при этом необходимо внести некоторые изменения: их нужно снабдить сосудом для титрования подходящего размера, в который опускают кончик бюретки, и устройство для перемешивания. [53]

Чтобы установить примерные границы применимости метода, необходимо взять за основу полученную опытным путем зависимость между диссоциацией и ошибками измерений. Для этого предполагается, что рассматриваемый комплекс поглощает сильнее, чем оба соседних комплекса и что при измерении оптической плотности эффект, связанный с диссоциацией, можно принять равным ошибке измерения. Экспериментальная ошибка равна тогда F. Относительная ошибка измерений, получаемая при работе с обычным спектрофотометром, например спектрофотометром Бекмана, в наиболее благоприятном случае составляет около 1 % [ см. G. Полоса ошибок принимается равной половине расстояния Ал для двух соседних комплексов. [54]

Пока единственным записывающим прибором такого типа является прибор фирмы Jasco и лишь для однолучевого спектрофотометра фирмы Shimadzu ( в котором измерения проводятся по точкам) выпускаются приставки как для измерения ДОВ, так и КД. Такие приставки начинают изготовляться или легко могут быть сконструированы также для других спектрофотометров, например фирмы Сагу. Трудно сделать выбор между приборами для измерения ДОВ и КД, и мы не будем пытаться здесь их оценивать. Однако необходимо подчеркнуть, что при конструировании таких приборов возникают гораздо более сложные проблемы, чем при создании хороших обычных спектрофотометров. Детали прибора должны быть очень высокого качества, и конструирование хорошего прибора требует проведения большой работы по усовершенствованию. Стоимость прибора такого типа высока, поэтому следует пользоваться предложениями фирм и проводить тщательную проверку приборов на своих образцах. [55]

На основании тех сведений о ДОВ и КД, которые мы имеем в настоящее время, трудно сказать, заменит ли в конечном счете один из этих методов другой в большинстве исследований. Хотя можно привести веские аргументы в пользу метода КД, большинство ученых, работающих в этой области, советуют продолжать изучение обоих явлений. Такая перспектива, а также то обстоятельство, что в спек-трополяриметрах, приборах для измерения КД и в обычных спектрофотометрах имеется слишком много одинаковых элементов как оптических, так и электронных, должны побудить фирмы к выпуску комбинированных приборов. [56]

Избирательное поглощение в УФ и видимых областях спектра характерно для ненасыщенных соединений. Их поглощение определяется наличием в ненасыщенных связях легко возбудимых л-электронов. Группы атомов, ответственные за избирательное поглощение, называют хромофорами. Простейшими хромофорами являются группы с изолированными кратными связями С С, СС, СО и др. Они также имеют поглощение в вакуумной УФ-области спектра или на границе рабочего интервала ( около 200 нм) обычных спектрофотометров. [57]

К преимуществам СФА относится возможность использования для аналитических целей светопоглощения в ультрафиолетовой или в инфракрасной областях спектра. Использование поглощения в невидимых участках спектра позволяет также увеличить чувствительность. Так, на границе видимой части спектра хромат поглощает довольно слабо ( е48о 610), хотя эта реакция считается чувствительной. Таким образом, измерение светопоглощения при 370 ммк увеличивает чувствительность определения хрома в 8 раз. Аналогичные возможности имеются для некоторых соединений, окрашенных в синий цвет. Их ХМакс лежит часто в ближней инфракрасной части спектра, не вполне доступной для исследования на обычном спектрофотометре. [58]

Если в распоряжении имеется подходящий растворитель, то пленку получают путем выливания более или менее концентрированного раствора полимера на соответствующую подложку. В качестве подложек используют жидкости, в которых полимер не растворяется и не набухает, а также пластинки из стекла, металла и других материалов. Готовую пленку снимают с этих подложек. Для тонкорастертых веществ в инфракрасной спектроскопии часто пользуются прессованием с КВг, однако применяемые высокие давления могут вызвать изменение структуры исследуемых веществ. Необходимую для многих исследований ориентацию образца получают растяжением в холодном или нагретом состоянии или же путем раскатывания или вальцовки, причем вместо одноосной часто достигается двойная ориентация. Основная трудность заключается в получении растянутых пленок однородной толщины, а также измерении толщины тонких пленок. Если нужно исследовать волокно-образные вещества, то требуются специальные оптические устройства ( микроосветители), с помощью которых образец исследуется в обычном спектрофотометре. Если применяется большое число очень тонких волокон, то рекомендуется помещать их в вещество, у которого собственное поглощение, по возможности, полностью отсутствует. Показатели преломления волокна и вещества должны быть близкими, чтобы уменьшить сильно мешающие при измерении потери из-за рассеяния. [59]

Страницы: 1 2 3 4