Тенер
Cтраница 1
Тенер отмечает, что использование параметров ЧВ и tR отвечает возможности приложения принципа суперпозиции к материалам, поведение которых описывается степенными функциями. При этом предполагается, что, хотя ползучесть при различных напряжениях оказывается нелинейным явлением, все же суперпозиция экспериментальных данных возможна. [2]
Томлинсон и Тенер [24, 25] разделили олигонуклеотиды по их длине на колонках с ДЭАЭ-целлюлозой, используя градиент концентрации ацетатного буфера с рН 7 5 в 7 М мочевине. В такой среде взаимодействия, обусловливающие образование вторичной структуры, либо сильно подавлены, либо не проявляются вовсе. [3]
 |
Кулачковый механизм для измерения ползучести при постоянном напряжении ( по Ли-дерману. Пояснение в тексте. [4] |
Данн, Миллз и Тенер [8] описали экстензометры двух типов для полимеров высокой и средней жесткости. Образец полимера в виде длинной прямоугольной призмы сечением 0 55 X 0 32 см зажимается между двумя парами ножей. Ножи соединены с четырьмя главными элементами устройства и перемещаются благодаря вращению двух стальных шаров сверху и двух роликов снизу. Зеркала, соединенные с роликами, образуют часть оптической системы, так что растяжение образца преобразуется вследствие вращения роликов в движение светового луча. [5]
Практически без изменений метод Тенера используется до сих пор. [6]
Существенное усовершенствование в методику хроматографии олигонуклеотидов ввел Тенер, предложивший включить в состав элюента 7 М мочевину. Это позволило подавить агрегацию крупных молекул олигонуклеотидов и их неспецифическую сорбцию ( за счет водородных связей) на полисахаридных матрицах DEAE-целлюлозе и DEAE-сефадексе, которые благодаря этому удалось успешно использовать для фракционирования олигонуклеотидов. При нейтральном рН в присутствии 7 М мочевины элюцией линейным градиентом концентрации NaCl ( 0 - 0 3 М) Тенер успешно разделял олигонуклеотиды по длине, а в кислой области рН, используя вклад положительного заряда оснований, олигонуклеотиды одинаковой длины - по составу. При рН 4 - 4 4 разделение шло главным образом по содержанию остатков цитозина и аденина ( они приобретают заметный заряд), а при рН 2 7 - по содержанию урацила, который остается при этом незаряженным. [7]
Обобщение экспериментальных данных с помощью двух параметров, предложенных Тенером, представляет собой тот предел эмпирического описания нелинейного поведения вязкоупругих материалов, который может быть достигнут без обращения к более строгим и сложным теоретическим построениям. Основная идея, которая стоит за этим эмпирическим подходом, заключается в том, что в принципе оказывается возможным отделить нелинейные эффекты, связанные с изменением напряжения от временной функции, описывающей развитие деформаций при ползучести в условиях приложения различных напряжений. [8]
Гидролизат наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой так, как это описано в статье Тенера ( стр. Измеряют оптическую плотность фракций при 271 или 260 ммк. Концевой фрагмент элюируется с колонки вместе с тринуклеотидами в третьей главной фракции. [9]
Тенер предлагает использовать низкозамещенные оксиалкшшроиз-водные целлюлозы ( оксиэтил -, оксипропил -, оксибутил -), а также карбоксиалкильные производные ( карбоксиметил -, карбо-ксиэтил -) в производстве бумаги и в производстве других эфиров целлюлозы. [10]
Панкреатическую РНК-азу и щелочную фосфатазу Е, coli покупают у фирмы Worthington Biochemical Corp. Ныо-Джерси); РНК-азу TI из такадиастазы покупают у фирмы Sankyo Co. Подробности, касающиеся хроматографирования, описаны в статье Тенера ( стр. [11]
Существенное усовершенствование в методику хроматографии олигонуклеотидов ввел Тенер, предложивший включить в состав элюента 7 М мочевину. Это позволило подавить агрегацию крупных молекул олигонуклеотидов и их неспецифическую сорбцию ( за счет водородных связей) на полисахаридных матрицах DEAE-целлюлозе и DEAE-сефадексе, которые благодаря этому удалось успешно использовать для фракционирования олигонуклеотидов. При нейтральном рН в присутствии 7 М мочевины элюцией линейным градиентом концентрации NaCl ( 0 - 0 3 М) Тенер успешно разделял олигонуклеотиды по длине, а в кислой области рН, используя вклад положительного заряда оснований, олигонуклеотиды одинаковой длины - по составу. При рН 4 - 4 4 разделение шло главным образом по содержанию остатков цитозина и аденина ( они приобретают заметный заряд), а при рН 2 7 - по содержанию урацила, который остается при этом незаряженным. [12]
После высушивания пластинки промывают водой и вновь высушивают. Продукты гидролиза РНК, полученные при обработке ее панкреатической рибонуклеазой или смесью панкреатической рибонуклеазы и рибонуклеазы Т ], наносят на расстоянии 5 см от одного из краев пластинки двумя порциями по 1 мкл, содержащими 2 - 3 ЕПаео ( см. статью Тенера, стр. [13]
Для дальнейшего подтверждения химической структуры отдельных олигонуклеотидов определяют состав оснований. При этом концевые нуклсотиды высвобождаются из олигонуклеотидов в виде нуклеотида или нуклеозид-дифосфата, которые определяют с помощью хроматографии па бумаге ( см. статью Тенера, стр. [14]
Джонс и Уильямсон ( Jones, Williamson, I960) предложили проводить деградацию полидезоксирибс - нуклеотидов реакцией / 3 -элиминирования, катализируемой основаниями, подобно тому как это происходит в случае РНК. Предполагалось, что концевой 5 -гидроксил должен быть превращен в карбонильную группу, инициирующую реакцию элиминирования. Это превращение должно протекать в условиях, не затрагивающих остальную часть молекулы нуклеиновой кислоты. Методы проведения этих реакций, разработанные Вижольи и Тенером ( Vizsolyi, Tenet, 1962), схематически представлены на рис. 6.3. На первой стадии 5 -концевой дезоксирибозный остаток молекулы ДНК действием перекиси водорода в присутствии инактивированного платинового катализатора окисляется в соответствующую уроновую кислоту. Благодаря использованию инактивированного катализатора удается избежать необратимой адсорбции ДНК, тогда как высокая реакционная способность перекиси водорода позволяет завершить окисление достаточно быстро. Далее уроновую кислоту превращают в пропиламид действием дициклогексилкарбодиимида и пропиламина, после чего проводят деградацию при помощи 0 25 H. NaOH В результате такой последовательности реакций образуется смесь, содержащая концевое основание, N - пропилфурамид и остальную часть полидезоксирибонуклеотидной цепи. Когда в качестве исходного соединения был взят тимидилил - ( 3 5) - тимидин, то в смеси продуктов деградации был обнаружен еще один, четвертый компонент, предположительно являющийся ангидротимидинуроновой кислотой. Чтобы перейти ко второму циклу деградации, полидезоксирибонуклеотид дефос-форилируют при помощи фосфатазы. [15]
Страницы: 1 2