Трансформация - клетка
Cтраница 1
Трансформация клеток, опирающаяся на новые биологические теории старения, открывает перед нами возможности предотвращения или даже обратимости процесса старения. [1]
ДНК ретровирусного вектора можно использовать для трансформации клеток саму по себе, но эффективность доставки ее в ядро и интеграции в геном клетки-хозяина крайне низка. [3]
После культивирования и трансформации клетки вводят в организм больного с помощью трансфузии, ин-фузии или инъекции. Эта процедура позволяет устранять генетические дефекты. [4]
Для клонирования в pUC19 донорную ДНК расщепляют одной из рестриктаз, чей сайт находится в полилинкере; плазмидную ДНК гидроли-зуют такой же рестриктазой, а затем обрабатывают щелочной фосфатазой. Обе ДНК смешивают в присутствии ДНК-лигазы Т4 и используют образовавшийся продукт для трансформации клеток, которые могут синтезировать ту часть р-галактозидазы ( LacZa), которая соединяется с продуктом гена lacZ с образованием активного фермента. Обработанные клетки высевают на питательную среду с ампициллином, ИПТГ и субстратом для Р - галактозидазы. Нетрансфоми-рованные клетки не могут расти в присутствии ампициллина, а клетки, несущие интактную плазмиду, образуют на среде с ампициллином колонии синего цвета. [5]
В отвечающих на PDGF клетках индуцируются оборот фосфа-тидилинозита, метаболизм простагландинов и активируются фос-фолипазы. В человеческих фибробластах кожи, стимулированных PDGF, возрастает в три раза коллагеназная активность. Полагают, что он принимает участие в трансформации клеток и вовлекается в процесс атеросклероза. [6]
Первым разрешенным к продаже пищевым продуктом, содержащим рекомбинантную ДНК, были трансгенные томаты ( разд. На этом примере мы рассмотрим вопросы, касающиеся безопасности трансгенных пищевых продуктов. Одна из главных проблем безопасности связана с векторами, которые используются для трансформации клеток растений. [7]
Поскольку в составе многих МДГ присутствуют промоторы транскрипции, а также особые последовательности-усилители, обладающие способностью повышать эффективность транскрипции с участием др. промоторов, внедрение МДГ может активно влиять на деятельность всего генного окружения. Возможно, активация определенных генов иногда оказывается полезной для организма. В то же время внедрение рядом с протоонкогенами МДГ может вести к онкогенной трансформации клетки. Предполагают, что в опухолевых клетках происходит активация процессов транспозиции нек-рых типов М.г.э., что ускоряет микро-эволюцию опухолевых клеток и способствует развитию опухолей. [8]
 |
Способы укладки белковых субъ-единий вируса. [9] |
Белковая оболочка надежно защищает нуклеиновую кислоту вируса от действия нуклеаз; она также способна внедряться в клеточную стенку бактерий, после чего ДНК обнажается и проникает через клеточную мембрану. В результате попадания вирусной ДНК или РНК в клетку останавливается синтез нуклеиновых кислот клетки-хозяина ( всего через несколько минут) и начинается синтез вирусных макромолекул. После заражения клетки-хозяина размножение вируса может привести к лизису клетки; кроме того, ДНК вируса может включаться в ДНК клетки и вызывать трансформацию клетки, в том числе и в раковую клетку. [10]
Другим примером генетической трансформации в природных условиях является заболевание растений, связанное с разрастанием корней. Причиной этого является внедрение в растительную клетку Rj. В этой плазмиде также имеется фрагмент ДНК, способный встраиваться в хромосому растительной клетки, подобно транспозону. Гораздо перспективнее представляется генно-инженерная трансформация клеток растений. Для этого необходимо получить жизнеспособный протопласт, из которого затем возможно было бы образование сначала трансформированной клетки, а затем и расте-ния-регенеранта. [11]
Хромосомная ДНК, как правило, сверхспирализована. Как это было впервые показано в лаборатории Георгиева в 1982 г. ( Лучник и Бакаев), сверхспирализация ДНК играет важную роль в биологической активности генома. Различные нуклеотид-ные последовательности в молекуле ДНК конкурируют за упругие витки и энергию сверхспирализации, поглощая их в конфор-мационных переходах. Конформационные изменения, связанные с этими напряжениями, имеют прямое значение для регуляции генов. Сверхспирализация генома изменяется при дифференцировке, старении и злокачественной трансформации клеток. [12]
 |
Физическая карта нспалн новой Ti-плазмиды. Гены One ответственны ia онкогеннчеть, ген Not - за синтез нопалниа, ген Arc - за деградацию аргинина. [13] |
Эти бактерии инфицируют двудольные растения и вызывают образование корончатых галлов - своеобразных опухолей растений, клетки которых способны размножаться в культуре без добавления факторов роста. Трансформированные клетки приобретают способность синтезировать необычные аминокислоты - опины, например, иопалин или октопин, являющиеся производными аргинина и служащие источником питания A. Какая именно аминокислота синтезируется, зависит от Ti-плазмиды, трансформировавшей клетку: одни бактерии A. И опухолевая трансформация, и синтез опинов вызваны Т - ДНК. В Т - ДНК содержится несколько генов, контролируемых отдельными промоторами, которые и определяют все свойства опухолевых клеток. Трансформация клеток Т - ДНК стабильно наследуется; некоторые трансформированные культуры существуют без изменения уже более 20 лет. [14]
Легкость, с которой чужеродная ДНК встраивается в хромосомы бакте рий, поразительна. Происходит ли то же самое в организме человека. На этот вопрос можно ответить утвердительно. Однако, в какой степени клетки человека устойчивы к изменениям, обусловленным внедрением в них вирусов, не ясно. Нам известно, что вирусы, вызывающие опухоли ( онкогенные), могут включаться в геном клеток животных. После включения вирусной ДНК в хромосому клетки-хозяина некоторые вирусные гены продолжают транскрибироваться. Другие находятся в неактивном состоянии, как в случае с фагом X. В редких случаях включение вирусной ДНК в геном клетки-хозяина приводит к трансформации клетки в опухолеподобное состояние. Ясно лишь, что свойства поверхностей трансформированных клеток при этом изменяются. Это в свою очередь приводит к уменьшению контактного ингибирования ( гл. [15]
Страницы: 1