Cтраница 1
Кристаллический трипсин представляет собой порошок белого цвета без запаха. Легко растворим в воде и в изотоническом растворе хлорида натрия. В сухом виде фермент устойчив; растворы стабильны в кислой среде, но легко разрушаются в нейтральной и щелочной среде. [1]
Кристаллический трипсин производит неглубокий гидролиз белка, так как он расщепляет только около 30 % пептидных связей. [2]
Кристаллический трипсин, выделенный из поджелудочной железы, производит сравнительно неглубокий, гидролиз белка. Только около 1 / 3 всех пептидных связей в белковой молекуле расщепляется трипсином. Как уже указывалось, основными продуктами триптического гидролиза белка являются полипептиды. Следует отметить, что под влиянием трипсина в процессе гидролиза белка освобождаются в небольшом количестве и сво-бодные аминокислоты. [3]
Кристаллический трипсин, выделенный из поджелудочной железы, производит сравнительно неглубокий гидролиз белка. Только около 1 / 3 всех пептидных связей в белковой молекуле расщепляется трипсином. Как уже указывалось, основными продуктами триптического гидролиза белка являются полипептиды. Следует отметить, что под влиянием трипсина в процессе гидролиза белка, могут освобождаться в небольшом количестве и свободные аминокислоты. [4]
Лучший метод получения кристаллического трипсина сводится к получению кристаллического его предшественника - трипсиногена - и к превращению последнего в кристаллический трипсин. При стоянии раствора трипсиногена в течение нескольких дней с сернокислым магнием или с энтерокиназой происходит превращение трипсиногена в трипсин. В поджелудочной железе содержится также специфический ингибитор, препятствующий действию трипсина. [5]
Действия рентгеновских лучей на разбавленные растворы кристаллического трипсина: инактивация, продолжающаяся после прекращения облучения. [6]
Раствор затем охлаждают, разбавленным аммиаком устанавливают рН, равный 8 2, и добавляют 30 мг кристаллического трипсина. Негидролизо-ванную часть осаждают трихлоруксусной кислотой, осадок отделяют центрифугированием и избыток трихлоруксусной кислоты удаляют путем экстракции эфиром. Водный раствор пептидов упаривают досуха. [7]
Лучший метод получения кристаллического трипсина сводится к получению кристаллического его предшественника - трипсиногена - и к превращению последнего в кристаллический трипсин. При стоянии раствора трипсиногена в течение нескольких дней с сернокислым магнием или с энтерокиназой происходит превращение трипсиногена в трипсин. В поджелудочной железе содержится также специфический ингибитор, препятствующий действию трипсина. [8]
Американским биохимиком Джоном Нортропом ( 1891 - 1987) выделен в кристаллической форме фермент пепсин и определена его белковая природа. Позжеученым был получен кристаллический трипсин. [9]
Ферментативное окисление боковых цепей белка ( в противоположность окислению проететических групп) является спорным. В ряде статей Сайзер [60, 61] утверждал, что разнообразные белки, в состав которых входит тирозин, - могут быть окислены тирозинаэой либо непосредственно, либо после предварительной обработки их кристаллическим трипсином. [10]
В 1937 г. Верле сообщил о пептиде, который образуется при действии фермента калликреина на кровяную плазму и стимулирует гладкую мускулатуру. Этот пептид известен в настоящее время под названием каллидина. В 1949 г. фармаколог Роха - э - Сильва обнаружил другой пептид, брадикинин, имеющий такие же фармакологические свойства, как и каллидин. Брадикинин выделяется из плазматического глобулина под действием яда бразильской змеи Bothrops jararaca или кристаллического трипсина. Брадикиноген и калл-идиноген идентичны аг-глобулинам. Эллиотт ( 1960 - 1961) выделил брадикинин из глобулина сыворотки свиньи, обработанного трипсином, применив противоточное распределение, хроматографию и электрофорез на бумаге. [11]
В 1937 г. Верле сообщил о пептиде, который образуется при действии фермента калликреина на кровяную плазму и стимулирует гладкую мускулатуру. Этот пептид известен в настоящее время под названием каллидина. В 1949 г. фармаколог Роха - э - Сильва обнаружил другой пептид, брадикинин, имеющий такие же фармакологические свойства, как и каллидин. Брадикинин выделяется из плазматического глобулина под действием яда бразильской змеи Bothrops jararaca или кристаллического трипсина. Брадикиноген и каллидиноген идентичны а2 - глобулинам. Эллиотт ( 1960 - 1961) выделил брадикинин из глобулина сыворотки свиньи, обработанного трипсином, применив противоточное распределение, хроматографию и электрофорез на бумаге. [12]
Многообразие функций и чрезвычайная лабильность белков свидетельствуют о необычайной сложности химической структуры их молекулы. Мы далеки еще от того, чтобы иметь возможность описать детали этой структуры. Мы до сих пор еще не знаем, например, какие молекулярные группы обусловливают протеолитическое действие кристаллического трипсина или гормональную активность кристаллического инсулина. [13]
Линейное расположение наследственных факторов в хромосоме позволяет предположить, что ДНК, составляющая основную часть этих факторов, располагается в хромосоме в строго определенном порядке. Мы установили, что она связана с белком, который образует каркас, или скелет, хромосомы. Это делается с помощью концентрированного, слегка подкисленного солевого раствора. Даже после удаления щелочных белков вид хромосом под микроскопом не изменяется, а при помещении их в нейтральную среду они сохраняют свою ДНК. Последнее свидетельствует о том, что ДНК в хромосомах с чем-то связана, так как в этой среде она обычно растворима; если бы ДНК не была связана, то она бы просто растворилась и вышла из хромосом. Вещество, с которым связана ДНК, представляет собой белок. Это доказывается действием на хромосомы чистого кристаллического трипсина, который переваривает белки. Полимеризованная ДНК при этом освобождается и образует плотный студень. Если же расщепить ДНК хромосом ферментом, который разрушает нуклеиновые кислоты, то остается белок в виде массы тонких извитых нитей, совершенно непохожих на хромосомы. [14]