Раствор уреазы
Cтраница 1
Раствор уреазы приготовляется следующим образом: несколько грамм бобов Canavalia ensiformis ( бобовник мечелистный) экстрагируют в течение 10 - 15 мин. [1]
Реактивы: 1) раствор уреазы: 0 5 г муки бобов сои2 насыпают в колбу на 50 мл, прибавляют 20 мл 30 % - ного ( по объему) спирта. Взбалтывают 10 минут, потом фильтруют или центрифугируют. [2]
 |
Гемпелевская пипетка для определения амино-вого азота. [3] |
Реактивы для разложения мочевины: 1) 10 % - ный раствор уреазы ( см. стр. [4]
Иногда в растворе уреазы может содержаться небольшое количество аммиака. Поэтому желательно готовить этот раствор, тщательно соблюдай описанные выше условия, и каждый новый раствор уреазы подвергать контрольному определению. [5]
В заключение добавляют 1 мл буферного раствора, приготовленного растворением 9 6 г NaH2PO4 и 17 9 г Na2HPO4 в 100 мл воды. Для того чтобы раствор уреазы был свежим, его нужно готовить заново каждый день. [6]
Удобрение растворяют в воде и концентрацию ионов аммония определяют путем введения объема раствора в гидроксид натрия и измерения выделяемого при этом газообразного аммиака по его абсорбции. Для определения карбамида раствор удобрения обрабатывают 1 % - ным водным раствором уреазы, чтобы конвертировать карбамид в МН. [7]
Иммобилизации фермента уреазы посвящено лишь несколько работ. Самнер и Грехем [443, 444] получили ферментативно активную нерастворимую в воде уреазу, добавляя небольшие количества хлористого натрия в нейтральный раствор уреазы в 30 % - ном спирте. Водонерастворимый продукт, вероятно, состоит из молекул уреазы, связанных цепочками дисульфидов; этот продукт удалось охарактеризовать лишь частично. Ризель и Качальски [445] сообщили о методе приготовления и свойствах водонерастворимых продуктов уреазы, полученных в результате химического связывания, уреазы диазоти-рованным сополимером и-амино-оь-фенилаланина с L-лейцином. Берн-фельд и Ван [446], а также Хикс и Апдайк [448] продемонстрировали возможность, иммобилизации ферментов в полиакриламидном геле. [8]
Осторожно встряхивают непрерывно в течение 10 - 15 мин. Выливают на большой фильтр, накрывают фильтр часовым стеклом и собирают фильтрат, который содержит практически всю уреазу. Помещают в холодильник, где раствор уреазы может храниться от 4 до 6 недель. [9]
Иногда в растворе уреазы может содержаться небольшое количество аммиака. Поэтому желательно готовить этот раствор, тщательно соблюдай описанные выше условия, и каждый новый раствор уреазы подвергать контрольному определению. [10]
Подобную методику можно применить для анализа растворов, содержащих глутамин, аспарагин, глу-таминовую кислоту, а также различные амины. Допустим, что шарик стеклянного электрода обклеили вокруг целлофановой мембраной и в сферическое пространство между целлофаном и внешней поверхностью стеклянного шарика ввели раствор карбамида. Если эту электродную систему опустить в раствор уреазы, карбамид диффундирует наружу через целлофан и реагирует с уреазой с образованием иона аммония, а ионы аммония диффундируют через целлофановую мембрану и обнаруживаются электродом. [11]
Приготовляют 100 мл 30 % - ного раствора этанола разбавлением 30 мл 95 % - ного этанола 70 мл дистиллированной воды, не содержащей аммиака. Добавляют 30 г муки из соевых бобов и 1 мл ацетатного буферного раствора ( раствор 15 г безводного ацетата натрия и 1 мл ледяной уксусной кислоты в 100 мл) и перемешивают в колбе емкостью 200 мл. Плотно закрывают колбу пробкой и энергично встряхивают 5 мин, а затем менее энергично-10 мин. Сохраняют только фильтрат, получаемый в течение 2 час, который собирают в сухую фарфоровую чашку. Разрезают фильтровальную бумагу ватман № 5 на полоски шириной 5 см и протягивают их через раствор уреазы. Полоски подвешивают на двух параллельно расположенных нитках на расстоянии около 1 § см в месте, где нет движения воздуха. Немедленно после высыхания разрезают полоски на кусочки размером около 1X2 5 см, помещают их в широкогорлую склянку с пробкой и хранят в холодильнике. [12]
Страницы: 1