Уропорфирина

Cтраница 1

Уропорфирины нерастворимы в эфире. [1]

Значительное структурное сходство многих природных порфиринов, таких, как уропорфирины I (11.6) и III (11.1) ил № копропорфирины I (11.7) и III (11.8), и близость значений рКа присутствующих в их молекулах карбоксильных групп обусловливают появление некоторых весьма специфических проблем, связанных с хроматографическим разделением этих соединений. Наилучшего отделения карбоксилсодержащих порфиринов от других водорастворимых метаболитов легче всего добиться путем этерификации этих соединений, в результате которой они приобретают липофильные свойства и могут быть выделены. Такой способ предварительного фракционирования порфиринов имеет немаловажное достоинство, заключающееся в том, что для сложных эфиров порфиринов уже разработано множество методов разделения и анализа ( разд. [2]

Порфирия - это редкое врожденное заболевание, при котором копро - и уропорфирины циркулируют в крови в чрезмерно большом количестве и выделяются с мочой и калом. Присутствие этих порфи-ринов вызывает воспаление кожи при попадании на нее света. [3]

Эталонная хроматограмма смеси метиловых эфиров порфиринов, содержа щих от 2 до 8 карбоксильных - рупп [ 7J ( с разрешения авторов.| Циркуляционная ВЭЖХ смеси примерно равных количеств ( по. [4]

Недавно была решена одна из наиболее сложных хроматографических проблем, связанных с анализом природных пор-фиринов - разделены уропорфирины I и III. Эти соединения ( 11.6 и 11.1) различаются лишь взаимным расположением остатков уксусной и пропионовой кислот в кольце D. [5]

Копропорфирины легко экстрагируются этил-ацетатом или эфиром из водного раствора при рН 4 ( изоэлектрическая точка порфиринов); уропорфирины остаются при этом в водной фазе. Количество порфирина в каждой фазе может быть определено колориметрически. [6]

Должен произойти поворот одного пиррольного остатка, в результате чего в соседних кольцах ( С и Д) пиррола в уропорфирине III ( фиг. [7]

Если этильная группа заменяется на остаток пропионовой кислоты, образуются изомеры копропорфиринового типа; если же метилы заменить на остатки уксусной кислоты, а этилы на остатки пропионовой кислоты, получаются уропорфирины. В случае заместителей трех типов ( четыре одного типа, и две пары других) возможны пятнадцать изомеров. [8]

Оптимальными условиями конденсации являются Проведение реакции в среде уксусной кислоты, Содержащей каталитическое количество иодистоводородной кислоты, при комнатной температуре. Этим методом были получены уропорфирины типов II, III и IV с выходами Q5, 60 и 55 % соответственно. [9]

В кале и моче содержатся копропорфирин СзеНзв Ов и у р о-порфирин C4oH38N4Oi6; их количества могут значительно возрастать при отравлениях. Расположение боковых цепей в копро - и уропорфиринах III такое же, как в гемине и, соответственно, в этиопорфирине III; что же касается копро-и уропорфиринов I. Синтезы уропорфиринов I, II и IV были недавно опубликованы Мак-Дональдом, синтез уропорфирина III - Трейбсом. [10]

Как и в случае пирролов, растворимость каждого отдельного порфирина в водных или органических растворителях зависит от природы его заместителей. Карбоксильные группы способствуют растворимости в щелочных водных растворах. Например, уропорфирины, у которых в каждом из четырех пиррольных остатков имеется один остаток уксусной и один - пропионовой кислоты, растворимы в щелочах, но не растворимы в эфире; копропорфирины, у которых в каждом кольце имеется метильная группа и остаток пропионовой кислоты, растворимы в щелочах, а также в эфире; протопор-фирины, у которых в двух пиррольных кольцах присутствует по одной метильной и одной ви-нильной боковой цепи, а в двух других пиррольных кольцах - по одной метильной и по одной пропионовокислой боковой цепи, растворимы в пиридине или лутидине и в эфире, но с трудом растворяются в щелочных водных растворах. [11]

В работах [28-30] описана хроматография порфиринкарбо-новых кислот на колонках с целлюлозой. Метод Эриксена [ 28 аналогичен описанному выше методу бумажной хроматографии, ( разд. В этих условиях уропорфирин остается сорбированным в верхней части колонки. С увеличением концентрации воды в элюенте ( до соотношения 3: 2) возрастает скорость миграции порфиринтетракарбоновых кислот, а последующее добавление небольших количеств концентрированного раствора аммиака приводит к полному высвобождению уропорфирина. Несмотря на то что с помощью этого метода можно достаточно быстро и эффективно провести разделение анализируемой смеси, мы предпочитаем использовать описанный ниже метод колоночной хроматографии на силикагеле, поскольку он позволяет достичь лучшего разрешения порфиринкарбоновых кислот. [12]

Вещества появляются на выходе при определенных значениях рН в зависимости от количества карбоксильных групп в боковой цепи. Этим методом в сочетании с ТСХ была разделена смесь порфиринов мочи. В частности, были выделены уропорфирины I ( 1 35 СН2СООН, 2 4 67 8 СН2СН2СООН) и III ( 1 3 5 8 СН2СООН, 2 4 6 7 СН2СН2СООН) 113 - 115 ] ( структура цикла и нумерация заместителей приведены в формуле на стр. [13]

Типичная процедура хроматографии сводится к следующему. Хроматографиче-ская подвижность порфиринов в этой системе возрастает с уменьшением числа присутствующих в их молекулах карбоксильных групп. Поскольку абсолютные значения Rf зависят от множества переменных, для идентификации соединений целесообразно использовать стандарты, разработанные фирмой Рог-phyrin Products. Описанная система позволяет достаточно хорошо разделить порфиринкарбоновые кислоты в соответствии с их основностью, однако она обладает меньшей эффективностью по отношению к порфири-нам, содержащим одинаковое число карбоксильных групп. Например, в этой системе можно разделить смесь копропорфири-нов I (11.7) и III (11.8), тогда как уропорфирины I (11.6) и III (11.1), а также многие имеющие важное значение природные порфиринкарбоновые кислоты не разделяются в ней. [14]

Страницы: 1