Cтраница 1
Индикаторный изотоп может находиться как в определяемом соединении, так и в ацетильной части продукта реакции. [1]
При наличии еще одного индикаторного изотопа опыт может быть повторен при тех же условиях. Скорость R останется, конечно, прежней, и будут получены две новые величины a R и § R. [2]
С точки зрения синтеза практически более полезным представляется метод, в котором индикаторный изотоп вводится в ангидрид. Однако при использовании подходящего способа метки радиоактивными можно сделать и определяемые стероид или сте-рин. Стероиды и стерины трудно количественно экстрагировать из биологических жидкостей; добавление к этим жидкостям радиоактивных субстратов в качестве индикаторов дает удобный способ измерения выхода. Если радиоактивный субстрат добавить в жидкость перед экстракцией, то по относительной радиоактивности выделенного вещества можно точно оценить полные потери целевого соединения в ходе анализа, включая и потери, обусловленные неполным ацетилированием. В работе [92] описано использование в таких анализах стероидов, меченных тритием, имеющих высокую удельную радиоактивность. [3]
Высокая чувствительность метода обратного изотопного разбавления с радиореагентом, а также селективность, которую обеспечивает применение индикаторного изотопа, позволяют определять микроколичества смесей первичных и вторичных аминов. В работе [86], в частности, описано использование этих методов для оценки содержания одиннадцати таких соединений в 1 мг белка. [4]
Если известно, что ацетилирование протекает количественно, то после обработки высушенного экстракта ангидридом, меченным сравнительным изотопом, к нему можно добавить соответствующий ацетат, приготовленный из ангидрида или субстрата, меченного индикаторным изотопом, чтобы с его помощью измерять выход и чистоту. [5]
При использовании носителя его количество следует выбирать с учетом возможностей применяемого способа выделения продукта реакции. Если метка индикаторным изотопом не используется, то все операции по удалению из обработанной пробы избытка реагента должны осуществляться количественно. Аликвотную часть конечного раствора подвергают хроматографиче-скому разделению для получения ацетата и определяют его радиоактивность с помощью жидкостного сцинтилляционного счетчика. [6]
Причем оказалось, что при более интенсивном перемешивании возрастает интенсивность изотопного обмена. Этот факт авторы объясняют двумя причинами: во-первых, откалыванием частиц размером меньше Ю-4 см и тем самым возбуждением оствальдова созревания и, во-вторых, ускоренной самодиффузией изотопа в объеме кристаллов осадка. Заметим, что авторы пришли к выводу об ускоренной самодиффузии индикаторного изотопа в объеме кристаллов осадка при их интенсивном перемешивании не из прямых опытов по определению коэффициента диффузии в кристалле, а косвенно, на том основании, что наблюдавшийся ими довольно большой ( 10 % - ный) и быстрый ( t 104 сек) обмен между твердой и жидкой фазами нельзя объяснить за счет малоэффективного и медленного механизма оствальдова созревания. Поэтому вероятность ее ускорения под воздействием ударов небольшая. Более вероятно допущение, что существует еще один механизм рекристаллизации в дисперсных системах, интенсивность которого значительно выше интенсивности оствальдова созревания. [7]
Несмотря на очевидные преимущества меченого ДНФБ как радиореагента, он не нашел широкого применения для определения аминов, что, возможно, объясняется его дороговизной по сравнению с уксусным ангидридом. Еще один недостаток ДНФБ-3Н связан с возможностью потерь радиоактивности по 3Н за счет реакции водородного обмена, когда этот реагент или его производное оказываются в сильнокислой среде. Недостатком ДНФБ как радиореагента является и заметное гасящее действие нитрогрупп, которое проявляется при измерении радиоактивности жидкостными сцинтилляционными счетчиками. Эти недостатки приводят к особенно большим затруднениям в анализах методом с двумя изотопами, как, например, метод анализа аминокислот с тритием в качестве сравнительного изотопа и с 14С в качестве индикаторного изотопа. [8]
Реагенты с относительно высокой удельной радиоактивностью широко используют в определениях стероидов и стсрипов, содержащихся в экстрактах биологических жидкостей, путем ацетили-рования гидроксильных групп этих соединений. Концентрации - тих соединений в таких экстрактах очень низки, так что в пробе может содержаться менее 1 мкг анализируемого соединения. В анализируемых объектах присутствуют первичные, вторичные и третичные гидроксильные группы, а некоторые стероиды ( например, гидрокортизон) могут содержать гидроксильные группы исех трех типов. Поскольку в анализируемых образцах содержатся лишь микро - или полу микроколичества соединений с гидроксильными группами, для их определения лучше всего подходят методы с использованием двух радиоактивных изотопов. Один - сравнительный изотоп - служит для определения количества производною, выделенного с помощью хроматографии, а второй - индикаторный изотоп - позволяет установить выход определяемого соединения, степень превращения и чистоту продукта. [9]
Реагенты с относительно высокой удельной радиоактивностью широко используют в определениях стероидов и стеринов, содержащихся в экстрактах биологических жидкостей, путем ацетили-рования гидроксильных групп этих соединений. Концентрации этих соединений в таких экстрактах очень низки, так что в пробе может содержаться менее 1 мкг анализируемого соединения. В анализируемых объектах присутствуют первичные, вторичные и третичные гидроксильные группы, а некоторые стероиды ( например, гидрокортизон) могут содержать гидроксильные группы всех трех типов. Поскольку в анализируемых образцах содержатся лишь микро - или полумикроколичества соединений с гидроксильными группами, для их определения лучше всего подходят методы с использованием двух радиоактивных изотопов. Один - сравнительный изотоп - служит для определения количества производного, выделенного с помощью хроматографии, а второй - индикаторный изотоп - позволяет установить выход определяемого соединения, степень превращения и чистоту продукта. [10]
Реагенты с относительно высокой удельной радиоактивностью широко используют в определениях стероидов и стсрипов, содержащихся в экстрактах биологических жидкостей, путем ацетили-рования гидроксильных групп этих соединений. Концентрации - тих соединений в таких экстрактах очень низки, так что в пробе может содержаться менее 1 мкг анализируемого соединения. В анализируемых объектах присутствуют первичные, вторичные и третичные гидроксильные группы, а некоторые стероиды ( например, гидрокортизон) могут содержать гидроксильные группы исех трех типов. Поскольку в анализируемых образцах содержатся лишь микро - или полу микроколичества соединений с гидроксильными группами, для их определения лучше всего подходят методы г использованием двух радиоактивных изотопов. Один - сравнительный изотоп - служит для определения количества производною, выделенного с помощью хроматографии, а второй - индикаторный изотоп - позволяет установить выход определяемого соединения, степень превращения и чистоту продукта. [11]