Cтраница 1
Фенилтиогидантоины сравнительно устойчивы в кислой среде; они могут быть выделены и идентифицированы. В некоторых случаях фенилтиогидантоины обрабатывают Ва ( ОН) 2 и идентифицируют образовавшуюся аминокислоту. [1]
Динитрофениламинокислоты ( ДНФ-аминокислоты) и фенилтиогидантоины ( ФТГ-аминокислоты) образуются при действии динитрофторбензола [151 - 154] или фенилгорчичного масла [155] на протеины или пептиды; продукты конденсации разделяют соответствующим методом. [2]
При введении в силикагель флуоресцирующего индикатора фенилтиогидантоины обнаруживаются в виде голубоватых пятен на флуоресцирующем фоне. После нагревания при 100 С в течение 15 мин пятна приобретают специфическую окраску. Чувствительность метода достигает 0 005 ммоль. [3]
Метилтиогидантоины аминокислот являются более летучими соединениями, чем соответствующие им фенилтиогидантоины. [4]
Фенил-изотиоцианат превращает N-концевые аминокислоты в фенилтио-карбамильные производные, отщепляющиеся в виде производных фенилтиогидантоина в условиях, при которых не повреждаются другие пептидные связи. Этот метод позволяет осуществить постепенную деградацию полипептидов и пептидов. [5]
До сих пор известно сравнительно небольшое число хроматографических систем растворителей, позволяющих разделить отдельные фенилтиогидантоины. [6]
Инглис и др. [107] при работе на белковом секвенаторе получали тиазолиноны и переводили их в фенилтиогидантоины, обрабатывая пятна на пластинке гептафтормасляной кислотой. После нанесения кислоты пластинки нагревали 10 мин при 140 С и быстро охлаждали до комнатной температуры. Однако этот метод непригоден для обнаружения треонина, серина, S-карбоксиметилцистеина, триптофана, № - фенилтиокарбамил-лизина или глутаминовой кислоты. [7]
При реакции белка с фенилизотиоцианатом образуется соответствующее фенилтиокарбамильное производное I, которое расщепляется хлористым водородом до фенилтиогидантоина II и модифицированного белка. [8]
Метод, предложенный Эдманом, основан на катализируемой кислотой реакции преобразования фенилтиокарбаматов пептидов, в результате которой образуются фенилтиогидантоины М - концевых аминокислот и укороченные пептиды. [9]
Образующиеся фенилтиокарбамилпроизвод-ные аминокислот подвергаются обработке безводной соляной кисдотой, под действием которой они превращаются в фенил-тиогидантоины. Фенилтиогидантоины различных аминокислот могут быть разделены хроматографически; при гидролизе щелочью они распадаются на фенилизотиоцианат и соответствующую аминокислоту, которая идентифицируется хроматографически. [10]
Фенилтиогидантоины сравнительно устойчивы в кислой среде; они могут быть выделены и идентифицированы. В некоторых случаях фенилтиогидантоины обрабатывают Ва ( ОН) 2 и идентифицируют образовавшуюся аминокислоту. [11]
Хотя методика разработана весьма детально, многое в ней нуждается в дальнейшей разработке. Высокая степень превращения в фенилтиогидантоины, регистрируемая по данным спектрофото-метрии, не всегда завершается высоким выходом продукта из реакционной смеси. Интересно отметить, что модификация Эриксона и Шеквиста [52] с применением на стадии циклизации хлористого водорода в 50 о-ной уксусной кислоте при 40 с последующим высушиванием из замороженного состояния по сравнению с предыдущими вариантами имеет определенные преимущества. [12]
Ионы бария удаляют с помощью двуокиси углерода. При щелочном гидролизе, однако, разрушаются фенилтиогидантоины серина, треонина, цистеина, а из ФТГ-аргинина образуется ФТГ-орнитин. Фенилтиогидантоин триптофана дает после гидролиза два пятна, из которых наиболее интенсивно окрашенное образует триптофан. [13]
Другой метод определения концевых групп, предложенный Эдма - ном2 ( 1950), включает избирательное отщепление N - концевых аминокислотных остатков. При реакции белка с фенилизотиоцианатом образуется соответствующее фенилтиокарбамильное производное I, которое расщепляется хлористым водородом до фенилтиогидантоина II и модифицированного белка. [14]
После нагревания бумаги появляются окрашенные пятна ФТГ, которые более интенсивны, пока бумага влажная. Наиболее яркие пятна и их окраска указаны в таблице жирным шрифтом. Авторы предполагают, что значения Rf, приведенные для ФТГ-производных серина, треонина и цистеина, не отвечают соответствующим фенилтиогидантоинам, а являются значениями Rf веществ, которые обра зуются из истинных ФТГ-производных в процессе анализа. [15]