Cтраница 1
Изучаемый фермент клеткой не синтезируется без специального индуктора, например изопропилтиогалактозида. Поэтому мы точно знаем момент включения синтеза этого белка: он совпадает с моментом введения индуктора ( см. стр. [1]
Активность изучаемых ферментов изменялась волноообразно. [2]
Поэтому полученные нами данные нельзя рассматривать как абсолютные доказа-тели уровня активности изучаемого фермента. Тем не менее исследование АТФ-азы в постнатальном онтогенезе кролика показало, что активность выявляемой нами, в основном Mg АТФ-азы, нарастает в сетчатке по мере ее роста и диф-ференцировки. Полученные нами данные о нарастании активности АТФ-азы в структурах сетчатки с возрастом находят подтверждение в биохимических данных ( Г. С. Полунин, 1970; Bonavita, Guarneri, 1967), согласно которым с возрастом АТФ-азная активность сетчатки увеличивалась в 2 - 4 раза. [3]
При анализе полученных результатов путем сравнения зон окрашивания в контрольных и опытных столбиках геля выделяют полосы, специфичные для изучаемого фермента. [4]
В цитоплазме и оболочке ганглиозных клеток АТФ-азная активность относительно слабая. Слабо выражена активность изучаемого фермента в клетках, находящихся в фазе дифференцировки наружного и внутреннего ядерного слоев. Для этого возраста характерна более высокая активность АТФ-азы в нейронах около сосудов сетчатки и менее высокая - в участках бедных сосудистыми элементами. В сосудах активность фермента высокая, причем нет еще четкой картины выявляемых структур сосудов. Очень слабая активность фермента отмечена в глиальных элементах сетчатки. [5]
Во-первых, сопрягающий фермент не должен лимитировать скорость изучаемой реакции. Практически 30-кратный избыток его по отношению к активности изучаемого фермента обеспечивает достаточна быстрое превращение образующегося продукта. Чтобы убедиться в правильности выбранных количеств сопрягающего фермента, полезно провести сравнительное определение активности с большим и меньшим ( в 4 раза) количеством. Если скорость изучаемого фермента при этом не изменяется, сопрягающая система подобрана правильно. Удобно изучать скорость реакции, когда добавленное количество вспомогательного фермента обеспечивает изменение оптической плотности на 0 03 - 0 20 в минуту. [6]
Основная задача заключается в химической модификации аминокислотного остатка в активном центре фермента, приводящей к потере каталитической активности. Наиболее общий подход состоит в синтезе соответствующих по структуре и химически активных аналогов субстрата изучаемого фермента. В общем случае аффинная метка имеет активный рофильный заместитель, который может давать устойчивую кова-лентную связь с нуклеофильной группой активного центра. [7]
Чтобы выделить ферменты, очень важно выбрать исходный материал. Для получения ферментов из растительных организмов используют самые разнообразные органы и ткани, наиболее богатые изучаемым ферментом. [8]
Если эту эндогенную затравку разрушить рибонуклеазой, которую затем можно удалить с помощью бентонита, то активность изучаемого фермента оказывается сильно ингибированной, в то время как активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы в этих условиях не меняется. Добавление же дезоксирибонуклеазы не действует на РНК-зависимую РНК-поли-меразу, но угнетает ДНК-зависимый синтез. Более того, обе ферментные системы отличаются по оптимуму рН и потребности в различных ионах. ДНК-зависимая ферментная система имеет оптимум рН около 7 5; при этом ее действие усиливается добавлением меркаптоэтанола и ионов марганца. РНК-зависимый фермент активнее всего при рН 9 5, но в этих условиях ионы марганца м меркаптоэтанол подавляют его активность. [9]
Влияние пестицидов на биологическую активность устанавливают путем определения количества микроорганизмов ( аммонификаторов, нитрификаторов, целлюло-зоразлагающих микроорганизмов и др.. В этих же почвах определяют активность почвенных ферментов ( каталазы, фосфатазы, ин-вертазы, протеазы, уреазы и др.) по скорости реакций, катализируемых изучаемыми ферментами. При необходимости выяснения лепосредственного влияния - яеети цидов на отдельные группы микроорганизмов пестициды вносят в среду при культивировании чистых культур. [10]
Оказалось, что среди алкилфосфонатов наибольшей степенью сродства к химотрипсину обладает гептилфосфонат, к трипсину - гексилфосфонат, а к ацетилхолинэстеразе - про-пилфосфонат. Следует отметить, что в рассматриваемой работе [406] не исследовались метил - и этилфосфонаты, а, как следует из ранее опубликованных данных [192], именно эти соединения обладают наибольшей антихолинэстеразной активностью. При сравнении полученных данных с результатами работ по зависимости между строением эфиров карбоновых кислот и степенью сродства их к активным центрам изучаемых ферментов [407, 408] наблюдается следующая общая закономерность: чем больше подобие между строением алкильной цепи заместителя, связанного с фосфором в фосфорорганических ингибиторах, и строением алкильной цепи в жирных карбоновых кислотах, тем выше антиферментная активность фосфорорганических соединений. [11]
Такая полная очистка, осуществленная для сравнительна ограниченного числа ферментов, представляет довольно сложную экспериментальную задачу. Неполная очистка ферментных; препаратов бывает связана со значительными трудностями из-за ничтожного ( количества фермента в исходном материале. Практически наиболее часто исследованию подвергаются препараты ферментов большей или меньшей степени очистки или же непосредственно с вытяжкой из объектов животного или растительного происхождения, содержащей изучаемый фермент. [12]
Во-первых, сопрягающий фермент не должен лимитировать скорость изучаемой реакции. Практически 30-кратный избыток его по отношению к активности изучаемого фермента обеспечивает достаточна быстрое превращение образующегося продукта. Чтобы убедиться в правильности выбранных количеств сопрягающего фермента, полезно провести сравнительное определение активности с большим и меньшим ( в 4 раза) количеством. Если скорость изучаемого фермента при этом не изменяется, сопрягающая система подобрана правильно. Удобно изучать скорость реакции, когда добавленное количество вспомогательного фермента обеспечивает изменение оптической плотности на 0 03 - 0 20 в минуту. [13]