Cтраница 1
Флуоресцеинизотиоцианат получали из перекристаллизованного, хро-матографическн чистого аминофлуоресцеина I. [1]
Раствор флуоресцеинизотиоцианата I в 0 05 М растворе Na2HPO4 имеет в видимой области один максимум поглощения при 493 ммк. Оптическая плотность этого раствора уменьшается со временем, поэтому его нельзя использовать для количественных измерений. Коэффициент экстинкции флуоресцеинизотиоцианата оказывается заниженным по сравнению с величиной емакс аминофлуоресцеина, по-видимому, вследствие того, что не удается полностью очистить препарат изотиоцианата от не поглощающих в этой области примесей. [2]
Методика определения содержания основного вещества в образцах флуоресцеинизотиоцианата основана на гидролизе флуоресцеинизотиоцианата в аминофлуоресцеин в щелочном растворе, измерении оптической плотности при 490 ммк, и вычислении фактического содержания вещества в растворе. [3]
Методика определения содержания основного вещества в образцах флуоресцеинизотиоцианата основана на гидролизе флуоресцеинизотиоцианата в аминофлуоресцеин в щелочном растворе, измерении оптической плотности при 490 ммк, и вычислении фактического содержания вещества в растворе. [4]
Для ряда случаев вполне достаточно описанного выше приближенного определения содержания основного вещества в образцах флуоресцеинизотиоцианата. [5]
Разработан уточненный метод определения содержания основного вещества, аминофлуоресцеина и других красителей IB образцах флуоресцеинизотиоцианата. [6]
Процесс хроматографии осуществляют так же, как и в случае нитрофлуоресцеинов, однако для прохождения фронта растворителя нужно 15 - 17 часов. Флуоресцеинизотиоцианат I дает светло-желтое пятно с Rf 0 26 - 0 33, II изомер-с Rf 0 35, причем разница в Rf двух изомеров составляет обычно 0 05; аминофлуоресцеин I дает четкое концентрированное пятно с Rf 0 09 - 0 13, II изомер - вытянутое размытое пятно, Rf которого колеблется в пределах 0 5 - 0 7; пятна обоих изомеров окрашены в желто-оранжевый цвет и так же, как пятна изо-тиоцианатов, флуоресцируют зеленым при облучении ультрафиолетовым светом с длиной волны 253 или 365 ммк. [7]
Растворы флуоресцеинизотиоцианатов в безводном метиловом спирте готовят в концентрации 2 мг / мл и оставляют стоять в течение 20 часов для полного превращения в метилтиока-рбаматы. [8]
При взаимодействии флуоресцирующего специфического антитела с антигеном образуется флуоресцирующий комплекс антиген-антитело, возникновение которого можно установить с помощью флуоресцентного микроскопа. В случае наличия в препаратах флуоресцеинизотиоцианата посторонних флуоресцирующих красителей, способных адсорбироваться на белке, при иммунофлуоресцентном определении возникает неспецифический флуоресцирующий фон, затрудняющий или делающий невозможной идентификацию антигена. [9]
Раствор флуоресцеинизотиоцианата I в 0 05 М растворе Na2HPO4 имеет в видимой области один максимум поглощения при 493 ммк. Оптическая плотность этого раствора уменьшается со временем, поэтому его нельзя использовать для количественных измерений. Коэффициент экстинкции флуоресцеинизотиоцианата оказывается заниженным по сравнению с величиной емакс аминофлуоресцеина, по-видимому, вследствие того, что не удается полностью очистить препарат изотиоцианата от не поглощающих в этой области примесей. [10]
Число метчиков, применяемых в настоящее время для изучения конформации сложных молекул, очень велико. К наиболее употребительным относятся акридиновый оранжевый, профлавин, 1-ани-линонафталин - 8-сульфокислота. Для ряда задач используются некоторые из флуорохромов, применяемых для количественного анализа, в первую очередь дансилхлорид и флуоресцеинизотиоцианат. Достоинством метчиков с активной группой является то, что точна известно место их локализации в биополимере. Это значительно упрощает интерпретацию получаемых результатов. [11]
В щелочном растворе метил-тиокарбамат очень быстро превращается в аминофлуоресцеин, как показывает хроматография на бумаге. Определив оптическую плотность растворов в максимуме поглощения ( 490 ммк), нетрудно было рассчитать содержание отдельных компонентов ( изотиоцианата, амина и веществ у старта) IB образце. При этом мы принимали, что вещества, находящиеся у старта, имеют тот же коэффициент экстинкции и молекулярный вес, что и аминофлуоресцеин. Метод был применен для анализа искусственных смесей, полученных прибавлением аминофлуоресцеина I к исходному образцу флуоресцеинизотиоцианата ( табл. 2, образец 1), содержание компонентов в котором было предварительно определено. Как показывает табл. 2 ( образцы 2 - 4), метод дает хорошие результаты при определении содержания отдельных компонентов в образцах. Относительная ошибка при определении флуо-ресцеинизотиоцианата составляет всего 1 7 %; в случае аминофлуоресцеина и красителей у старта она значительно выше ( 20 и 25 % соответственно) ввиду небольших количеств этих веществ. [12]
Для этого гранулы носителя включают в 20 % - ную желатину. Частицы геля выдерживают 5 ч при 37 С в растворе желатины, затем смесь переносят в подходящий для этих целей небольшой контейнер и оставляют на несколько часов в холодильнике. Желатиновые блоки замерзают, их режут микротомом на образцы толщиной 10 мкм. Полученные срезы наносят на предметные стекла и покрывают тонкими покровными стеклами для предохранения от высыхания. С помощью флуоресцентного спектрофотометра записывают спектры поглощения и излучения флуоресцеинизотиоцианата меченной флуоресцеином аминопептидазы, как свободной, так и связанной с ага-розным или декстрано вым носителем. [13]