Cтраница 3
Полярность этих веществ также возрастает при удлинении цепи. Соответственно температура при ГХ пептидов должна быть выше, и это сильно ограничивает выбор жидких фаз. Даже если предположить, что с ростом длины цепи число выявляемых компонентов существенно уменьшается, оно все же остается настолько большим, что даже эффективности ГХ и родственных ей методов оказывается недостаточно: исследователю приходится мириться с неудовлетворительным разделением и наложением пиков пептидов. Подобные явления будут более заметны для сходных по структуре веществ и соединений, имеющих большое число возможных изомеров. Это означает, что как раз для наиболее длинных фрагментов, которые, естественно, дают большую информацию об исходной последовательности, разделение будет хуже. [31]
Этот метод заключается в том, что после лизиса клеток хозяина ДНК различных клонов, фиксированную например, на нитроцеллюлозном фильтре, после удаления сопутствующих белков подвергают термообработке, в ходе которой происходит отжиг - раскручивание двунитевых молекул и образование клубков однонитевых ДНК. Если теперь обработать препаратом однонитевой ДНК-зонда раскрученные ДНК клонов при медленном охлаждении, то может произойти образование гибридных двунитевых молекул - гибридизация - и включение метки в фиксированный препарат ДНК. Для образования гибридных молекул достаточно комплементарности последовательностей обеих ДНК из 15 - 20 нук-леотидов. Вероятность случайного совпадения такого числа комплементарных оснований ( или еще более длинных фрагментов ДНК) в неродственных молекулах ДНК ничтожна. Поэтому гибридизация является чрезвычайно селективным и надежным тестом на присутствие родственной молекулы ДНК. [32]
РНК-азные гицролизагы 55 РНК клеток КВ. Они нашли, что для того, чтобы расположить все олигонуклеотиды в одну линейную последовательность, необходимо проанализировать более 35 фрагментов из частичных гидролизатов. В большинстве случаев фрагменты, выделенные этим методом, оказывались гомогенными сегментами исходной молекулы, содержащими оцин или более остатков специфических олигонуклеотидов. Полученные результаты в виде схемы приведены на рис. 4.1. Все олигонуклеотиды, перечисленные в табл. 4.2, можно сгруппировать в грех основных участках молекулы. Расположение этих олигонуклеотицов в составе относительно коротких продуктов частичного гидролиза было установлено полным гидролизом Т - - и панкреатической РНК-азами. Более длинные фрагменты, перекрывающие короткие с известной последовательностью, позволили сделать вывод о структуре более длинных участков, пока, наконец, все олигонуклеотиды из табл. 4.2 не удалось правильно расположить в пределах каждого из этих трех больших участков молекулы. [33]