Хлормеркурибензоат
Cтраница 1
Хлормеркурибензоат широко применяется при оценке роли SH-групп в активности ряда ферментов или же для защиты этих группировок белка во время модификации белков при помощи других реагентов. При определении количества SH-групп белков я-хлормеркурибензоат берут в небольшом избытке и остаток переводят йодом в йодобензойную кислоту. Иод, в свою очередь, также берут в избытке и его остаток определяют титрованием гипосульфитом. [1]
SH-группы, в частности n - хлормеркурибензоатом, иодацетами-дом, иодозобензойными кислотами, малеиновой к-той и ионами тяжелых металлов, а также о-фенантроли-ном, 8-оксихинолином, связывающими железо, входящее в состав активного центра С. Цианид вызывает медленное и необратимое инактивирование С. [2]
Одним из таких специфических реагентов является n - хлормеркурибензоат. В противоположность окислительным агентам, могущим реагировать с другими функциональными группами белков, указанная реакция имеет стехиометрический характер. [3]
А с h - romobacter fischeri, представляет собой флаво-протеид с ФМН в качестве простетич. Активность фермента подавляется n - хлормеркурибензоатом, что свидетельствует о существенной роли SH-группы в осуществлении ферментативных функций. [4]
Фосфоглицеромутаза выделена в кри-сталлич. Такие реагенты на SH-группы, как п хлормеркурибензоат, ионы тяжелых металлов и F - подавляют активность фосфогли-церомутазы. [5]
Дугласе и Хоган ( Douglass, Hogan, 1958) показали, что гомо-генаты почки крысы в аэробных условиях также способны расщеплять кверцетин, но не рутин или 2 3-дигидрокверцетин. Добавляя к системе 0 001 М nopa - хлормеркурибензоат, они могли идентифицировать промежуточный-продукт расщепления, которым оказалась протокатеховая кислота. [6]
Этот специфический реагент на - SH-группу, введенный Геллерманом [ 22, 52а ], наиболее широко применялся Барроном и Сингером [69, 70] при изучении роли - SH-группдля реакционной способности ряда ферментов. Хлормеркурибензоат особенно пригоден для указанной цели, так как при низких концентрациях он соединяется только с - SH-группами и может быть легко удален добавлением тиолов. При такой обработке ингибирование, вызванное n - хлормеркурибензоатом, почти всегда уменьшается. Это же свойство позволяет применять его для защиты сульфгидрильных групп во время модификации белков при помощи других реагентов. [7]
Реакция синтеза ( или гидролиза) АТФ в митохондриях осуществляется при участии трех ферментных систем: собственно АТФ-синте-тазного комплекса, транслоказы адениннуклеотидов и переносчика неорганического фосфата. Последний катализирует реакцию электронейтрального переноса неорганического фосфата в митохондрии и из них. Активность переносчика ингибируется SH-модификаторами, такими как N-этилмалеимид и n - хлормеркурибензоат. Следствием этого является ингибирование SH-реагентами реакций окислительного фос-форилирования и гидролиза АТФ, катализируемых митохондриями. [8]
 |
Результаты колориметрического определения тиольных групп в вытяжке печени крысы по реакции с N-этилимидом малеиновой кислоты. [9] |
Продажный кристаллический яичный альбумин реагирует с N-этилимидом малеиновой кислоты только после денатурирования дюпонолом. В этом же образце яичного альбумина после обработки его n - хлормеркурибензоатом при рН 4 6 в течение 15 мин [31] обнаружено около трех тиольных групп па 1 моль протеина. [10]
Очищенный фермент с молекулярной массой 207000 содержит 2 моль пиридоксаль-5 - фосфата на 1 моль. В отличие от фосфо-рилазы животных у него отсутствуют в качестве структурных компонентов серинфосфат и нуклеотиды, не наблюдается активирование аде-ниловой кислотой. Картофельная фосфорилаза содержит 6 сульфгид-рильных групп на 1 моль, тормозится n - хлормеркурибензоатом, причем ингибирование лишь частично снимается прибавлением цистеина. [11]
Этот специфический реагент на - SH-группу, введенный Геллерманом [ 22, 52а ], наиболее широко применялся Барроном и Сингером [69, 70] при изучении роли - SH-группдля реакционной способности ряда ферментов. Хлормеркурибензоат особенно пригоден для указанной цели, так как при низких концентрациях он соединяется только с - SH-группами и может быть легко удален добавлением тиолов. При такой обработке ингибирование, вызванное n - хлормеркурибензоатом, почти всегда уменьшается. Это же свойство позволяет применять его для защиты сульфгидрильных групп во время модификации белков при помощи других реагентов. [12]
Добавляют 20 мМ ацетат и наблюдают обратимую стимуляцию дыхания, связанную с поглощением добавленного ранее кальция. В кювету вносят 1 мкМ рутениевый красный и вслед за ним еще 200 мкМ СаС12 и 2 4-динитрофенол. Вновь убеждаются в торможении активного транспорта Са2 при неизменной сукцинатоксидазной активности митохондрий. Полученные данные анализируют с учетом природы ингиби-рующего действия n - хлормеркурибензоата и рутениевого красного на активный транспорт Са. Данные оформляют в виде полярограмм. [13]
В следующем ниже разделе будут подробно рассмотрены доказательства гомогенности белковых производных, полученные при ультрацентрифугировании и путем электрофоретических измерений. Кроме того, будет показана применимость метода химической модификации белков для исследования связи между их структурой и активностью. Некоторые физико-химические свойства белковых производных будут лишь кратко рассмотрены. Способность к кристаллизации большого значения не имеет и ее используют только при очистке белка, а так же как критерий, указывающий на отсутствие расщепления белка. Ряд других производных белков также был получен в кристаллическом виде. Кристаллическое производное яичного альбумина и n - хлормеркурибензоата при диализе против цистеина диссоциирует с образованием нативного белка. [14]
Молекулярный вес энзима в тысячи раз превышает молекулярный вес субстрата. Поэтому при образовании промежуточного соединения на молекуле фермента должна быть область, к которой присоединяются как продукт, так и субстрат. Промежуточное соединение представляет собой своеобразное переходное состояние субстрат-фермент и фермент-продукт. Имеется ряд доказательств того, что в молекуле фермента каталитически активными являются определенные группы. Активная часть ферментов составляет малую долю от всей его молекулы. Для выявления этой активной части применяют специфические реагенты, не вызывающие денатурации фермента, но реагирующие с активной группой. Такой реагент должен тормозить действие фермента и связывать определенную группу в низкомолекулярных соединениях. Торможение активности под действием ингибитора обычно обратимо и по удалении ингибитора активность восстанавливается. Так, например, n - хлормеркурибензоат реагирует с SH-группой низкомолекулярных веществ, образуя меркаптиды. SH-rpynna часто является активной функциональной группой ферментов, в частности дегидраз. [15]
Страницы: 1