Восходящая хроматограмма
Cтраница 2
По 5 мм3 полученного таким образом раствора наносят на две полоски хроматографической бумага ( WF 11, FN 11) длиной по 22 см и получают восходящие хроматограммы. [16]
Для одномерных хроматограмм используют бумажные полосы шириной 4 5 - 5 см и длиной 30 - 50 см. Для получения двумерной хроматограммы применяют листы бумаги размером примерно 20 X 25 - 40 X 45 см. Восходящие хроматограммы получают при перемещении подвижного растворителя через поры бумаги снизу вверх, а нисходящие - сверху вниз. [17]
Для одномерных хроматограмм используют бумажные полосы шириной 4 5 - 5 см и длиной 30 - 50 см. Для получения двумерной хроматограммы применяют листы бумаги размером примерно 20 X 25 - 40 X 45 см. Восходящие хроматограммы получают при перемещении подвижного растворителя через поры бумаги снизу вверх, а нисходящие - сверху вниз. [18]
Несмотря на то что известны достаточно удобные методы им-прегнирования, приводящие к получению равномерно пропитанного экстрагентом слоя носителя по всей поверхности хроматограммы, отношение Am: As все же может меняться вдоль хроматограммы из-за изменения площади поперечного сечения подвиж ной фазы, в особенности для, восходящих хроматограмм; это может иметь место как в бумажной, так и в тонкослойной хроматографии, но в первом случае, вероятно, в большей степени. Такие результаты позволяют предположить, что некоторая, небольшая, часть носителя и неподвижной фазы остается лишь слегка смоченной элюирующим раствором. Это предположение подтверждается экспериментально. [19]
Две Одинаковые йробы испытуемого раствора и свидетеля витамина Da в количестве 0 025 - 0 03 мл на расстоянии 3 см друг от друга и 5 - 7 см от нижнего листа бумаги. При восходящей хроматограмме бумагу помещают нижним концом в растворитель на 1 - 2 м, при нисходящей - в лодочку, в которую затем наливают растворитель. Для лучшего насыщения камеры парами растворителя на дно ее наливают небольшое количество растворителя. [20]
Были использованы и другие экспериментальные приемы. Вильяме и Кирлей92 упростили метод, предложив способ восходящей хроматограммы, когда растворитель перемещается снизу вверх под действием капиллярных сил. [21]
После подсушивания капли бумажную полосу помещают в камеру для получения восходящей хроматограммы ( см. рис. 14, стр. Параллельно с развитием хроматограммы определяют влажность ( в %) используемой в работе бумаги. Затем бумажную полосу сушат, проявляют раствором нингидрина ( см. стр. [22]
 |
Восходящая хроматография. [23] |
X 27 см на расстоянии 2 5 см от обоих краев, и нижний край листа погружается в налитый на дно камеры ( или в стоящий на нем сосуд) растворитель ( восходящая хроматограмма); верхний край листа фиксируется на проходящей поперек камеры стеклянной палочке. [24]
По технике получения хроматограммы делят на нисходящие и восходящие. При получении нисходящей хроматограммы растворитель перемещается по бумаге сверху вниз, восходящей - снизу вверх. При нисходящей хроматограмме достигается больший коэффициент скорости перемещения вещества Rf, но пятна получаются более размытые, чем при восходящей хроматограмме, где пятна меньше и более компактны. Поэтому первую хроматограмму обычно применяют для качественной оценки состава смеси, а вторую - для количественного определения ее компонентов. Кроме того, применяют круглую ( радиальную) хроматограмму, при которой бумага находится в горизонтальном положении, а растворитель перемещается от центра к периферии. Для такой хроматограммы вырезают круг из фильтровальной бумаги диаметром 250 - 300 мм. В центре круга простым карандашом вычерчивают дополнительный круг диаметром 20 мм и на маленький круг наносят 8 - 10 капель ( по 2 - 3 мкг) испытуемой смеси. Бумагу высушивают на воздухе, а затем зажимают между крышками эксикатора или крышками чашки Петри, которые служат хроматографиче-скими камерами. Растворитель непрерывно подают в центр круга, обычно опуская в растворитель нарезанные полоски бумаги, соединенные с центром этого круга. Для хроматографии используют специально приготовленную фильтровальную бумагу, которая должна удовлетворять следующим требованиям: не адсорбировать хроматографиру-емых веществ; быть однородной по плотности и содержать минимум зольных, а также других примесей, растворимых в данных растворителях. [25]
Слегка влажная бумага имеет тенденцию сворачиваться, причем ось искривления бывает параллельна продольной оси. Неоднородность структуры бумаги может привести к неравномерной скорости протекания растворителя в разных направлениях и вследствие этого к плохой воспроизводимости результатов. Перемещение фронта растворителя ( границы между сухой и влажной бумагой) на нисходящей хроматограмме происходит более равномерно, чем на восходящей хроматограмме. Однако даже при нисходящем токе жидкости поведение растворителя вблизи резервуара жидкой фазы и у движущегося фронта неодинаково. В исходной части хроматограммы в процессе первоначального пропитывания растворитель протекает как по поверхности бумаги, так и сквозь пропитанную зону. Вблизи фронта растворителя жидкость просачивается вперед через тончайшие капилляры. Скорости передвижения растворенных веществ определяются относительными величинами распределения между подвижной жидкой фазой и стационарной гелеподобной фазой, которая, как принято считать, находится в аморфных участках целлюлозы. Хорошая бумага содержит не менее 96 % сс-целлюлозы ( нерастворимой в крепких растворах NaOH), около 40 % которой находится в аморфном состоянии. Консден, Гордон и Мартин [1] сопоставляли стационарную фазу с концентрированным раствором растворимого полисахарида. Скорости движения отдельных аминокислот приближаются к рассчитанным для простого распределения между двумя жидкими фазами, но ввиду сильного сродства основных аминокислот к целлюлозе, по-видимому, проявляются эффекты специфической адсорбции или ионного обмена. [26]
Исследуемый раствор помещают в углу листа на расстоянии 3 см от обоих краев бумаги. Лист свертывают в трубку, скрепляют проволокой и опускают в цилиндр или кувшин подходящего размера, где налит первый растворитель. После высушивания лист свертывают в другом направлении и погружают в новый цилиндр, с другим растворителем, после чего следуют обычная обработка бумаги и проявление. Как указывают авторы, восходящая хроматограмма значительно чище нисходящей. В частности, недостатком метода является невозможность насыщения атмосферы кислотами ( 1лп основаниями, что очень важно для лучшего разгона аминокислот. [27]
В 1 мл содержится 2 мг каждого металла. Затем вырезают полоски бумаги шириной 2 - 3 см и длиной 15 - 20 см. Каплю исследуемого стандартного раствора наносят на полоску бумаги на 2 5 см выше ее края - так, чтобы она не растекалась, затем высушивают на воздухе. Помещают полоску бумаги в разделительную камеру для получения восходящей хроматограммы. На дно камеры наливают ту же смесь растворителей, которая употреблялась при определении скорости движения растворителя. Через 40 - 50 мин вынимают полоску бумаги, сушат и проявляют. Определяют значение Rf ионов для различных образцов бумаги, сравнивают их с табличными данными ( см. Приложение I) и делают заключение о разделительной способности изученных образцов бумаги. Полученные данные сводят в таблицу. [28]
При этом лучше использовать имеющиеся в продаже пленки. После испарения растворителя пластинки ставят в специальную разделительную камеру, заполненную подвижным растворителем на высоту примерно 0 5 см. Пространство камеры должно быть насыщено парами растворителя. При получении восходящей хроматограммы подвижная фаза движется от линии старта вверх. По мере ее развития появляются пятна, характерные для определенных веществ, так как компоненты. [29]
С нижней стороны пробки посередине делают разрез, в который вставляют полоску фильтровальной бумаги такой длины, чтобы ее нижний край был погружен в растворитель на дне колбы. Края бумажной полоски не должны прикасаться к стенкам колбы. Таким путем получают простейшую восходящую хроматограмму. [30]
Страницы: 1 2 3