Двухмерная хроматограмма

Cтраница 2

За последнее время употребляются трубки из нержавеющей стали, что удобнее для изготовления и прочнее. Для двухмерных хроматограмм употребляются трубки диаметром 1 25 - 2 00 см, длиной от 50 до 65 см. Ширина щели - 0 4 - 0 5 см. У такой трубки бруски для поддерживания бумаги могут удерживаться отдельно в специально для этого приспособленных камерах. [16]

На двухмерных хроматограммах наблюдается еще более четкое разделение различных фосфатов в щелочной среде. [17]

Большим преимуществом двухмерной распределительной хроматографии является возможность обнаружения больших количеств компонентов в исследуемой смеси. Например, на двухмерной хроматограмме, проявленной раствором нингидрина, отмечается положение шестидесяти различных веществ. Метод одномерной распределительной хроматографии был использован Критским87 для обнаружения нуклеиновых оснований ами-лофосфазы ( фосфорилазы), а также инозина. [18]

Понятно, что разделение сложной смеси зависит от применяемых реагентов. На этом основан оригинальный способ двухмерной хроматограммы. Исходное вещество наносят на левый верхний угол бумажного листа и подвергают хроматографи реванше теми же приемами, которые были описаны для бумажной полоски. В результате на левом краю листа образуется ряд пятен. Таким образом, первоначально полученные пятна становятся исходными и хроматографируются сверху вниз. Теперь хроматограмма может получиться от каждого пятна. [19]

В 1951 г. Дата и Харрис [114] опубликовали сообщение, в котором говорится, что моча кошек и оцелотов содержит вещество, дающее нингидринную реакцию. Было установлено, что на двухмерных хроматограммах на бумаге в системах фенол - аммиак и коллидин - лутидин оно перекрывается лейцином и изо-лейцином. Одномерным хроматографированием с использованием грег-бутилового спирта удается получить индивидуальное пятно, которое после обработки перекисью водорода уже нельзя обнаружить на прежнем месте. Казалось вероятным, что имеют дело с новой аминокислотой, содержащей серу; в таком случае исчезнование пятна объяснялось бы окислением этой аминокислоты до сульфоксида или, что более вероятно, до сульфона. [20]

После того как и второй растворитель продвинется на нужное расстояние ( через 24 - 72 час. Ниже приводится фотография ( рис. 7) двухмерной хроматограммы гидролизата шерсти. [21]

Однако использование элюирования преду сматривает предварительное полное хроматографическое отделение определяемого вещества от сопутствующих. Поэтому элюирование чаще применяют для определения веществ в зонах двухмерных хроматограмм. Недостатком элюирования яв 4 ляется то, что для последующих точных измерений необходим раствор достаточной концентрации, следовательно, на бумагу требуется наносить сравнительно большие количества вещества. Раствор следует наносить на линию старта не пятном, а длинной полосой для создания высокой загрузки хроматограмм. [22]

Методы испытания пятен на бумаге включают: а) измерение площади пятнаш; б) измерение большой полуоси овального пятна 108 - 109; в) измерение количества прошедшего или отраженного света методом спектрофотометрииш; г) метод задержки. Последний способ, предложенный Виландом ш, сводится к получению двухмерной хроматограммы, в которой во втором измерении находятся непрерывные полосы реагента. В том случае, когда реагент взаимодействует с пятном выделенного компонента, его перемещение замедляется и образуется V-образная выемка в фронте реагента. [23]

Если имеется гидролизат белка, содержащий полный набор аминокислот, то на одномерной хроматограмме нельзя получить пятен, соответствующих всем присутствующим аминокислотам. F к При различных скоростях - Движения аминокислот в различных растворителях применяются двухмерные хроматограммы. Приступая к выполнению двухмерно. [24]

Разделение пигментов с помощью одномерной хро-матограммы позволяет определить либо хлорофиллы, либо каротиноиды. Поэтому, когда необходимо установить содержание всех компонентов пигментной системы пластид в небольшом количестве растительного материала, применяют двухмерную хроматограмму. В этой случае последовательно разгоняют пигменты на бумаге сначала в одном направлении, а затем в направлении, перпендикулярном первому. [25]

Схема прибора для Разделяющий раствор радиальной хроматографии. [26]

Понятно, что успех разделе ния зависит от применяемых реагентов. Оригинальным является способ, при котором для разделения используют не один реагент, а два. При этом получается двухмерная хроматограмма. Исходное вещество наносят на левый верхний угол бумажного листа и хромато-графируют так же, как описано выше. В результате этого на левом краю листа образуется ряд пятен. Лист, не обрабатывая реактивами, высушивают и помещают в камеру так, чтобы ряд пятен оказался по верхнему краю листа, и обрабатывают другим разделяющим веществом. Таким образом, первоначально полученные пятна становятся исходными и снова хроматографируют-ся сверху вниз. [27]

Высота камеры 65 - 75 см, диаметр узкой части 23 - 26 см, диаметр широкой части 27 - 30 см. Ширина бортов раструба, на которых покоится ванночка, не меньше 1 5 - 2 0 см. Верхняя, открытая часть камеры должна быть ровной и горизонтальной. Кроме свинцовых камер, для одномерной хроматографии, а также и для двухмерной, могут употребляться стеклянные аквариумы достаточного размера. Для поддержания ванночки в них вставляются специальные стеклянные подставки. Трубы вставляются в плотно пригнанный поднос, в который наливается вода и растворитель. Для двухмерных хроматограмм употребляются свинцовые почти воздухонепроницаемые коробки, с двумя стеклянными сторонами, для наблюдения за движением растворителя. Коробка плотно покрывается свинцовой или стеклянной крышкой. Размеры коробки 78 - 78 - 15 см. Ширина коробки ( последний размер) может быть увеличена до 50 см, если камеру приспособить для нескольких ванночек, чередующихся с брусками. Это дает возможность ставить в одной камере больше двух хроматограмм. [28]

Страницы: 1 2