Восходящее хроматографирование

Cтраница 1

Хроматографическое разделение на полоске клиновидной формш. [1]

Восходящее хроматографирование происходит немного медленнее, но растворитель в этих условиях не может стечь с хроматограммы. Когда фронт растворителя достигает верхнего края бумаги, он останавливается, если камера герметически закрыта, а атмосфера в ней насыщена парами; если эти условия не выполнены, то растворитель испаряется с верхней части бумаги внутрь камеры и при этом вещество постепенно накапливается вблизи и на линии фронта растворителя. Одновременно из-за диффузии пятна расплываются, так что их диаметр-увеличивается и в результате ухудшается и разделение, и эффективность обнаружения. [2]

Основные типы колонок. [3]

Для восходящего хроматографирования ( см. разд. Хро-матографические колонки различных размеров и типов, от аналитических и препаративных до пилотных, выпускают многие фирмы, специализирующиеся на производстве хроматографиче-ского оборудования. Колонки, выпускаемые фирмой Pharmacia Fine Chemicals, специально предназначены для гель-хроматографии. [4]

Волее удобным является восходящее хроматографирование, так как при нисходящем токе подвижная фаза стекает по пропитанной бумаге гораздо быстрее и разделение ухудшается. [5]

В аналитической практике в большинстве случаев применяется метод восходящего хроматографирования. [6]

Пластинки предварительно г. ромы-вают ацетоном, высушивают и еще раз промывают подвижной фгзой в условиях восходящего хроматографирования. [7]

При нисходящем хромато-графировании растворитель или система растворителей подаются к верхнему краю пластинки с помощью фитиля ( жгута), погруженного в сосуд с растворителем. По эффективности эта методика не имеет преимуществ перед восходящим хроматографированием. Аппаратура, применяемая для нисходящего хроматографирова-ния, более громоздка, чем аппаратура, которая используется при восходящем хроматографировапии. [8]

Однако, если плотность пробы значительно больше плотности элюента, метод восходящего хроматографирования неприменим, особенно для обес-солнвания, и даже в колонках с плунжерами направление потока должно быть нисходящим. [9]

Следует различать восходящую и нисходящую хроматографию в зависимости от того, движется ли растворитель снизу вверх по листу бумаги или сверху вниз. Как правило, метод нисходящего хроматографиро-вания дает более эффективные результаты, но зато метод восходящего хроматографирования более прост и позволяет легко проводить большое число анализов. [10]

Бенетт и Хефтмен [87] проводили восходящее хроматографирование на закрепленных слоях, руководствуясь этим же принципом. Они помещали свободный адсорбент в алюминиевый желобок, укрепленный на верхнем краю пластинки. [11]

Для разделения таких соединений можно рекомендовать к-бутанол пли изоамиловый спирт, насыщенный водой. Фридкии, а также Стромингер и Фридкин применяли для контроля ферментативного синтеза дезоксири-бозидов тиоурацилабутанол, насыщенный 3 % - ной борнсй кислотой, а для 6-меркаптопуринои - восходящее хроматографирование в системе 5 г сернокислого аммония. [12]

В последнем случае сначала наносят пробу на полоску бумаги, которую после этого смачивают, пропуская через смесь диэти-лового эфира, метанола и воды ( в соотношении 80: 16: 4 или 63: 25: 12 соответственно при высокой или низкой влажности воздуха) и следя за тем, чтобы в эту смесь не погружалась та часть бумаги, где находится стартовая линия. Полоску бумаги погружают сначала с одной, а затем с другой стороны от стартовой линии и дают пропитывающей смеси подняться вплотную к стартовой линии; при этом зоны или пятна, нанесенные на стартовую линию, обычно сужаются. По окончании разделения полоски подвешивают в вытяжном шкафу на 1 - 5 мин, пока не улетучатся органические растворители вместе с избытком влаги, и после этого кладут на металлическую рамку, показанную на рис. 3.7. Часть бумаги под стартовой линией ( при восходящем хроматографировании) отгибают, помещают в лоток и закрепляют там при помощи тяжелой стеклянной палочки. Далее закрепленную хроматограмму помещают в стеклянную камеру, которую затем закрывают. Подвижную фазу наливают в лоток через отверстие в крышке камеры по истечении 5 мин. Такая выдержка необходима для восстановления в камере равновесия, которое обычно нарушается, когда камеру открывают. Этих нескольких минут вполне достаточно для полного испарения эфира и почти полного испарения метанола, так что в порах бумаги остается только вода, которая быстро абсорбирует другой компонент неподвижной фазы. Таким образом, хроматогра-фирование можно начинать уже через 5 мин. Описанная методика делает ненужной применявшуюся ранее процедуру приведения в равновесие бумаги с нанесенной пробой и элюента. [13]

В том случае, когда необходимо при помощи хроматографии на бумаге идентифицировать р-аминоспирты, удаление относительно большого количества солей представляет определенные трудности. Удачное решение этой задачи было предложено Рисом. В системе фенол ( 70 г) - вода ( 30 мл) ( к которой добавлено 5 о по объему раствора аммиака с уд. Восходящее хроматографирование в феноле ( на высоту 6 см) оказывается достаточным; бумагу затем высушивают при 45 и отрезают зону, содержащую соль. После этого на листе бумаги можно провести хроматографирование ( З - аминоспиртов. [14]

В качестве тонкого хроматографического слоя применяют силикагель марки КСК, измельченный на шаровой мельнице, просеянный через сито с отверстиями 160 - 200 меш, промытый концентрированной НС1 и водой и высушенный при 120 в течение 24 час. Силикагель наносят тонким слоем ( 1 0 мм) на шлифованную матовую стеклянную пластинку размером 17 X 24 см, от края пластинки проводят старт и капилляром наносят рабочий спиртовой раствор. Нанесение раствора осуществляют без тока холодного воздуха, так как слой силика-геля предварительно не закрепляют. Пластинку помещают в камеру с притерной крышкой ( высотой 25 см) и стеклянной наклонной подставкой. Восходящее хроматографирование происходит в смеси растворителей: 8 % - ный метанол в хлороформе в течение 30 мин. Затем хроматограмму вынимают из камеры, высушивают под тягой до полного исчезновения запаха растворителя, площадь силикагеля от стартовой до фронтовой линии делят на десять равных поперечных полос. [15]

Страницы: 1