Хроматография - вещество
Cтраница 1
Хроматография веществ в тонких слоях ( ХТС) является одним из видов распределительной хроматографии. Разделение проводят на пластинках, покрытых тонким слоем носителя ( окись алюминия, кизельгур, силикагель и др.), удерживающего неподвижный растворитель. Нижний край пластинки с нанесенной на нее пробой опускают в подвижный растворитель. При движении растворителя происходит перераспределение веществ между двумя растворителями и перемещение их с различной скоростью, в результате чего вещества разделяются на составные компоненты. [1]
Кислая окись алюминия используется для хроматографии веществ кисл ного типа: кислых аминокислот, карбоновых кислот, ароматических кисл кислых красителей, сульфокислот, а также неорганических анионов. [2]
Основная окись алюминия используется для хроматографии веществ осш ного типа: аминов, амидов, основных аминокислот, алкалоидов, инсектицид. Основная окись ал миния используется также для удаления перекисей и обезвоживания oprat ческих растворителей. [3]
Еще одной трудностью является отсутствие теории хроматографии веществ с непрерывным распределением молекулярных частиц, разработка которой очень сложна. [4]
Аналогичные закономерности имеют место и при элютивной хроматографии веществ на ионитах с сорбирующим поверхностным слоем q той только разницей, что вместо точки перегиба выходной кривой рассматривается максимальная точка концентрационной зоны. [5]
Влияние температуры на сорбцию и элюирование выделяемых аффинной хроматографией веществ рассмотрено далее ( гл. В заключение этого раздела следует подчеркнуть, что всегда следует помнить о влиянии температуры, поскольку воспроизводимые результаты можно получить, только если температура тщательно контролируется; особенно это касается аналитических приложений аффинной хроматографии. [7]
Таким образом, метод тонкослойной хроматографии с фронтальным разделением элюента мало пригоден для хроматографии веществ одного класса. С другой стороны, этот метод следует применять для разделения веществ разных классов с резко различной адсорбируемостью. Указанный метод подходит также для определения микропримесей. В этом случае элюент подбирают таким образом, что один из растворителей, входящих в его состав, служит вытеснителем для макрокомпонента и не является таковым для микрокомпонента. [8]
Окись алюминия может быть в различных формах: основной, нейтральной и кислой. Кислую окись алюминия используют для хроматографии веществ кислотного характера, например карбоновых кислот, кислых аминокислот и других. Нейтральную окись алюминия обычно применяют для хроматографии из неводных растворов органических соединений, таких как предельные углеводороды, альдегиды, кетоны, спирты, фенолы, эфиры. [9]
Помимо неподвижных фаз в разд. Добавки применяют, в частности, при хроматографии веществ, способных к образованию водородных связей - свободных органических кислот, спиртов, эфиров аминокислот и др. В качестве добавок ( к неполярным и слабополярным фазам) используют высококипящие двухосновные и одноосновные карбоновые кислоты ( около 10 %): терефталевую, себациновую, стеариновую и бегеновую. [10]
Растворитель должен растворять разделяемые вещества при рабочей температуре разделения. Этого обычно можно достичь даже в трудных случаях, подбирая подходящие смеси растворителей с требуемой элюирующей способностью. Например, для хроматографии вещества, содержащего длинную углеводородную цепь, прикрепленную к сильно полярной группе, можно использовать систему растворителей, содержащую, во-первых, углеводород ( скажем, толуол), обеспечивающий необходимую растворяющую способность, во-вторых, аммиак, позволяющий добиться требуемой элюирующей способности, и, в-третьих, изопропанол, являющийся связующим растворителем, обеспечивающим гомогенность подвижной фазы. [11]
Термин обратнофазовая распределительная жидкостная хроматография, или, как принято говорить, хроматография в обращенных фазах ( ХОФ; по-английски RFC - reverse phase chromato-graphy), подразумевает обратную картину. Неподвижная жидкая фаза представлена в этом случае органическим растворителем или малополярной водно-органической смесью, а подвижной фазой служит водный раствор буфера или аналогичная смесь, но с большей полярностью, чем у неподвижной фазы. Очевидно, что такая система предназначена для хроматографии веществ, в целом гидрофобных, и фракционирование компонентов смеси идет по степени их гидро-фобности. [12]
В работе Финлайзсна и Мозессона [157] дан пример высокой разделяющей способности диэтиламиноэтилцеллюлозы. Первый пик соответствует 77 % белка в образце; при повторной хроматографии вещества, соответствующего второму пику, оказалось, что в нем содержится 34 % вещества первого пика. [13]
Другой путь получения защищенных дезоксицити-дин-5 - фосфатов этого типа состоит в ацилировании З - О-тетрагид-ропиранил - 2 -дезоксицитидин - 5 -фосфата с последующим кислотным гидролизом в мягких условиях для отщепления тетрагидропира-нильных групп. Полимеризация смеси № - анизилдезоксицитидин-5 - фосфата и № 3 - О-диацетилдезоксицитидин - 5 -фосфата приводит к промежуточному соединению, которое обрабатывали концентрированным раствором аммиака для удаления ацильных групп. С помощью хроматографии производилась частичная очистка линейных олигодезоксицитидиловых кислот от низкомолекулярных олигону-клеотидов ( от ди - до октануклеотидов), однако необходима дальнейшая обработка, чтобы получить относительно гомогенные вещества, из которых ни одно не было выделено в химически чистом виде. Повторная хроматография вещества, обработанного моноэстеразой для удаления концевых фосфатных групп, показала, что количество примесей в главных пиках увеличивается с увеличением длины цепи олигонуклеотидов. [14]
При пропускании веществ с различными молекулярными весами ( различными объемами молекул) через слой сорбента с определенными размерами пор молекулы с большим объемом задерживаются лишь в порах большого размера. В поры, размер которых меньше размера молекул, большие молекулы не проникают из-за пространственных затруднений. Поэтому они вымываются из колонки раньше молекул с небольшими размерами, для которых доступно большее число пор и, следовательно, больший объем пор. В этом методе хроматографии вещества выходят из колонки в порядке уменьшения молекулярных весов. Обычно во всех других методах хроматографии, особенно при разделении гомологических рядов, вещества элюируют в порядке возрастания молекулярных весов. [15]
Страницы: 1 2