Cтраница 1
Продолжительное центрифугирование недопустимо, если в корзину центрифуги не подается сухой воздух; 3) смесь фильтруют через пористый стеклянный фильтр при минимальном разрежении, прессуя образец трамбовкой из нержавеющей стали, того же диаметра, что и фильтр. Время контакта образца с влажным воздухом должно быть минимальным. После заливки водой и удаления ее избытка продукт стабилизируют, обрабатывая на фильтре горячей водой и 1 % - ным раствором соды, а затем снова промывают водой. [1]
В случае малого размера частиц адсорбента могут возникать трудности в процессе элюирования, связанные с неудовлетворительным отделением последних даже после продолжительного центрифугирования, и поэтому получаемые элюаты непригодны для спектрофото. [2]
Ход исследования подобен описанному для крови, но вместо 1 мл насыщенного раствора углекислого калия к образцу добавляют 0 5 мл; для отделения экстракта требуется более интенсивное и продолжительное центрифугирование. Фон мочи несколько выше фона крови и составляет в среднем 0 07 - 0 08 единиц оптической плотности. [3]
В ходе процесса окисления наблюдается изменение стабильности эмульсии. В течение первых 16 - 20 ч эмульсия изопропилбензола, стабилизированная пальмитатом калия, настолько устойчива, что для разделения фаз требуется продолжительное центрифугирование. Однако через некоторое время ( при содержании примерно 25 - 30 % гидроперекиси) эмульсия становится значительно менее стабильной и быстро расслаивается. [4]
Характеристикой пористости геля, если это истинный ксерогель, может служить степень его набухания. Для гранулированного геля емкость по растворителю можно легко определить следующим образом: отвешенное количество сухого геля оставляют набухать в избытке растворителя, растворитель между гранулами геля удаляют осторожным продолжительным центрифугированием на сите и вновь взвешивают набухший гель ( подробнее эта методика описана на стр. [5]
Для максимального снижения содержания маточного раствора в осадке применяют два приема: отжим осадка и промывку. Осадок отжимают по-разному в зависимости от используемого фильтрующего аппарата: на нутч-фильтре - путем отжима и трамбовки, на фильтр-прессе и друк-фильтре - продувкой воздухом или инертным газом, на центрифуге - продолжительным центрифугированием. После окончательного отжима осадка его промывают на фильтре водой или другим подходящим растворителем. Промывные воды, если они содержат основной продукт, обычно присоединяют к основному фильтрату. [6]
Приготавливают 2 % - ный водный раствор освобожденного от фосфо-липидов вещества и фракционируют его дифференциальным центрифугированием на центрифуге Спинко, модель L. Вещество, представляющее собой специфический полисахарид, остается в растворе. Оно не осаждается при продолжительном центрифугировании даже при 105 000 g, и его получают в виде прозрачного вязкого раствора. Каждое из веществ выделяют после диализа лиофильной сушкой. [7]
Используемые слои адсорбента должны быть однородными и плотными, иначе они могут пострадать во время манипулирования по нанесению вещества на пластинку, если поверхность будет рыхлой и пористой. Если размер частиц адсорбента ( важный фактор при получении однородных пластинок) слишком мал, могут возникать трудности при элюировании. Так, например, в наших лабораториях успешно выполнены соответствующие разделения алкалоидов на пластинках, приготовленных с трисиликатом магния в качестве адсорбента, но очень тонкие частицы не могли быть удовлетворительно отделены даже после продолжительного центрифугирования, и поэтому такие элюаты непригодны для спектрофотометриче-ского исследования. [8]
Антисыворотки, применяемые для качественных и количественных определений, должны быть свободны от липидов и частиц. Там, где это возможно, используют стерильную стеклянную посуду и принимают все возможные предосторожности против бактериального загрязнения. Сыворотки можно центрифугировать в стерильных конических пробирках емкостью 12 мл при 4 и 2000 об / мин; липиды, поднимающиеся к поверхности, отсасывают, а надосадочную жидкость декантируют в чистую стерильную коническую пробирку. Продолжительное центрифугирование повторяют до тех пор, пока не прекратится образование осадка в течение 8-часового центрифугирования при охлаждении. Количество антигена, необходимое для получения четкой реакции, зависит от содержания антитела в примененной антисыворотке. Большое количество полисахарида может дать растворимые комплексы, поэтому вначале следует вносить немного антигена. Если 5 - 10 у антигена не дают реакции, можно внести 50, 100, 250 и 500 у. Все полисахариды, используемые в качестве антигенов, и олигосахариды, гаптоны, растворяют в стерильном 0 85 % - ном растворе хлористого натрия, к которому добавлена капля хлороформа. После перемешивания пробирку инкубируют 1 час при 37 и оставляют на ночь в холодильнике. [9]
Общий объем Vt равен объему колонки. Внешний объем Увв можно определить, если хроматографировать на колонке, заполненной гелем, какое-либо высокомолекулярное вещество, не способное проникать в поры геля: объем растворителя, прошедшего через слой геля до проскока хроматографируемого вещества, соответствует внешнему объему. Внутренний объем Упор связан с пористостью геля. Упор определяется сравнительно просто. Для этого следует знать величину ST, называемую емкостью геля по растворителю и равную количеству растворителя в граммах, поглощенного при набухании 1 г сухого геля. Для определения емкости по растворителю навеску сухого геля оставляют набухать в выбранном растворителе, затем последний удаляют осторожным продолжительным центрифугированием, после чего набухший гель взвешивают. [10]