Cтраница 2
Вирусные белки могут быть получены генно-инженерным методом, однако нужно учитывать следующие моменты. Как правило, вирусные белки состоят из нескольких полипептидных цепей, в ряде случаев химически модифицированных. Не только в бактериальной, но и в дрожжевой клетке нет структур, осуществляющих созревание таких белков. Следовательно, микробные клетки могут продуцировать только отдельные полипептидные цепи. Это резко снижает или сводит на нет их иммуногенность, которая определяется конформационными антигенными детерминантами, формирующимися в процессе образования третичной или четвертичной структуры белка. Ограниченное применение вирусных белков-антигенов относится к белкам HBS-вируса гепатита В человека и белка VPj-вируса ящура. HBS-антиген, синтезируемый дрожжевыми клетками, давал иммунный ответ, хотя и меньший по сравнению с инактивированным вирусом, однако достаточно высокий. Образовавшийся белок не секретировался из клеток, а в процессе их разрушения и выделения антигена выход его значительно снижался, что ставило под сомнение всю технологическую схему. [16]
Однако сегодня мы знаем, что образующиеся при бактериальной транскрипции мРНК всегда несколько длиннее, чем это необходимо для полипептида или полипептидов, которые они кодируют. Это объясняется тем, что мРНК содержат на 5 -конце некодирующий полинуклео-тидный лидер. Длина этих лидеров может составлять от 25 до 150 оснований. Полигенные мРНК могут также содержать нетранслируемые межгенные области, или спейсеры, которые разделяют участки, кодирующие отдельные полипептидные цепи, и, видимо, помогают регулировать скорость трансляции. Полигенные мРНК кодируют обычно две или большее число разных полипептидных цепей, функционирующих вместе-например, два или большее число ферментов, принимающих участие в одной и той же цепи метаболических реакций, например в биосинтезе какой-нибудь аминокислоты. [17]
Обработка инсулина динитрофенолом показала, что этот белок содержит две различные N-концевые аминокислоты, на основании чего можно было сделать вывод, что состоит он из двух полипептидных цепей. Цепи соединяются между собой молекулами цистина. Обработав инсулин реактивом, который раз-ру Шает связь между двумя атомами серы в цистине, Сангер расщепил молекулу инсулина на две отдельные полипептидные цепи. [18]
Четвертой, не упомянутой выше, но приобретающей в последнее время все больший интерес, задачей, разрешаемой при помощи химического изменения белков, является применение его в качестве вспомогательного средства при исследовании порядка чередования аминокислотных остатков. Работа в этом направлении была существенно облегчена введением метода Зангера [9] и весьма широко проводится английскими биохимиками. Новый способ отличается от обычного способа приготовления белковых производных или измененных белков тем, что полученные соединения гидролизуют и образующиеся производные аминокислот изолируют. Часто этим способом исследуют структуру не только нативных белков, но и продуктов неполного ферментативного или кислотного гидролиза, а также структуру продуктов частичного окисления. При разрыве поперечных цистиновых связей ( - S-S -) путем окисления до остатка цистеиновой кислоты ( - SO3H), которое также было введено Зангером [10], молекула белка распадается на отдельные полипептидные цепи. [19]
И тот, и другой полипептиды обладают следующими основными полосами поглощения: 3300 и 3080 см - 1750 см-1, 1650 см-1 и 1550 см-1. Первые две и четвертая полосы поглощения соответствуют валентным колебаниям групп N - Н и С О, измененным действием водородных связей. Чтобы проверить расположение этих связей ( внутри цепи или между цепями), измеряют поглощение света, поляризованного по направлению ориентации и перпендикулярно ему. У р-формы мы наблюдаем обратный дихроизм. Следовательно, у а-формы направление колебаний групп N - Н и С О параллельно оси ориентации ( внутримолекулярные Н - связи), тогда как у р-формы оно перпендикулярно ей и водородные связи связывают между собой отдельные полипептидные цепи. [20]