Cтраница 3
Из разбавленного дистиллата отбирают пипеткой 25 мл и вносят в коническую колбу, в которой находится 25 мл раствора солянокислого гидро-ксиламина указанной выше концентрации. Через 15 минут к пробе приливают последовательно три-пять капель 0, 1 % - ного раствора метилоранжа и одну-две капли 0, 1 % - ного раствора Азур - П ( или индигокармина) и титруют 0 5 н раствором щелочи до перехода розовато-сиреневого цвета в серовато-зеленый. [31]
На яДерной РНК, прочно связанной в хроматине и блокированной белками, Азур В, несомненно, даст спектр поглощения, отличающийся от спектра поглощения этого же красителя, но адсорбированного ядрышковой или цитоплазматической РНК. Все эти обстоятельства говорят за то, что Азур В может быть с успехом использован для изучения структурного состояния НК в клетке. Использование Азура В в количественной цитохимии НК по той же причине пока затруднено. [32]
Метиленовый голубой и Азур В примерно одинаково связываются НК. Для обнаружения ДНК и РНК используют способность Азура В к метахроматической дифференциации НК. Эта дифференциация усиливается, если для раздельного обнаруже-лия НК применять смесь метиленового голубого и Азура В. На препаратах, обработанных этой смесью красителей, ядро окрашено в сине-зеленый, цитоплазма и ядрышко - в пурпуровый цвет. [33]
Адсорбция основных красителей структурами протоплазмы в слабокислой среде происходит главным образом за счет НК. В цитохимии НК обычно используют пиронин, метиловый зеленый, галлоцианин, толуидиновый синий, метиленовый синий, Азур В. [34]
Эти красители относятся к группе тиазинов. Метиленовый голубой представляет собой тетраметилтионин, Азур В - триме-тилтионин. Оба они метахроматичны в отношении полианионов. При этом в большей степени метахромазия свойственна Азуру В. Последний с РНК дает глубокую пурпуровую окраску, с ДНК - сине-зеленую. Метиленовый голубой дает метахромазию только при взаимодействии с сильными полианионами, например с му-кополисахаридами, содержащими сульфатные группы. [35]
Вопрос о первичности действия ауксина на синтез РНК нельзя, конечно, считать решенным. Нам все же кажется более вероятным, что действие ауксина на клетку связано в первую очередь не столько с синтезом РНК, сколько с изменением структур нуклеиновых кислот или нуклеопротеидов. Во всех этих случаях можно предполагать, что образование комплексов между введенным красителем и нуклеиновыми кислотами клеточных структур блокирует их нормальные функции. Именно этой точки зрения придерживался Бэр ( Вег, 1949), считая, что подобное блокирование препятствует взаимодействию ауксина с нуклеиновыми кислотами. Бэр ( Вег, 1949) полагал, что ауксин в растительных клетках вступает в соединения с нуклеопротеидами, что приводит к усилению синтеза протоплазматических белков. При этом активируется связывание электролитов и поглощение воды. Сходной точки зрения придерживается Масуда ( Masuda, 1960), который показал, что 1 - 2-часовая обработка РНК-азой отрезков колеоптилей овса приводила к снижению содержания РНК в тканях и сорбции азура I, что сопровождалось увеличением выхода кислоторастворимого фосфора и РНК во внешнюю среду. На замороженных препаратах было установлено, что уменьшение сорбции азура наблюдается в поверхностных слоях протоплазмы. Отрезки, обработанные РНК-азой, теряли способность реагировать на ауксин. Реакция на ауксин постепенно восстанавливалась при перенесении отрезков в воду. Однако, если отрезки после инкубации с РНК-азой переносились в раствор 2-тио-урацила ( 1 10 - 3 М), то способность реагировать на ауксин не восстанавливалась. Ингибирующее действие 2-тиоурацила могло быть снято одновременным добавлением урацила или ури-дина. [36]
Вопрос о первичности действия ауксина на синтез РНК нельзя, конечно, считать решенным. Нам все же кажется более вероятным, что действие ауксина на клетку связано в первую очередь не столько с синтезом РНК, сколько с изменением структур нуклеиновых кислот или нуклеопротеидов. Во всех этих случаях можно предполагать, что образование комплексов между введенным красителем и нуклеиновыми кислотами клеточных структур блокирует их нормальные функции. Именно этой точки зрения придерживался Бэр ( Вег, 1949), считая, что подобное блокирование препятствует взаимодействию ауксина с нуклеиновыми кислотами. Бэр ( Вег, 1949) полагал, что ауксин в растительных клетках вступает в соединения с нуклеопротеидами, что приводит к усилению синтеза протоплазматических белков. При этом активируется связывание электролитов и поглощение воды. Сходной точки зрения придерживается Масуда ( Masuda, 1960), который показал, что 1 - 2-часовая обработка РНК-азой отрезков колеоптилей овса приводила к снижению содержания РНК в тканях и сорбции азура I, что сопровождалось увеличением выхода кислоторастворимого фосфора и РНК во внешнюю среду. На замороженных препаратах было установлено, что уменьшение сорбции азура наблюдается в поверхностных слоях протоплазмы. Отрезки, обработанные РНК-азой, теряли способность реагировать на ауксин. Реакция на ауксин постепенно восстанавливалась при перенесении отрезков в воду. Однако, если отрезки после инкубации с РНК-азой переносились в раствор 2-тио-урацила ( 1 10 - 3 М), то способность реагировать на ауксин не восстанавливалась. Ингибирующее действие 2-тиоурацила могло быть снято одновременным добавлением урацила или ури-дина. [37]
Пророк Иеремия цитирует в своей книге ( Иер. Михея, дошедшее до нас в книге последнего ( Мих. Урии, сына Шемаии из Кариаф-Иарима. Услышав об этом, Урия бежал в Египет, но и там его схватили царские люди и привели его к царю. В главе 28 своей книги Иеремия сообщает читателю о споре, который у него был в доме Яхве на глазах у жрецов и всего народа с пророком Ананией сыном Азура из Гаваона; в отличие от Иеремии Анания предсказывал быстрое избавление Иудеи от вавилонской угрозы. [38]