Вирусные антиген
Cтраница 2
С развитием технологии рекомбинантных ДНК природа биотехнологии изменилась окончательно и бесповоротно. Появилась возможность оптимизировать этап биотрансформации более прямым путем, создавать, а не просто отбирать высокопродуктивные штаммы, использовать микроорганизмы и эукариотические клетки как биологические фабрики для производства инсулина, интерферона, гормона роста, вирусных антигенов и множества других белков. Технология рекомбинантных ДНК позволяет получать в больших количествах ценные низкомолекулярные вещества и макромолекулы, которые в естественных условиях синтезируются в минимальных количествах. [16]
Следует отметить, что процесс этот не так прост, как представляется в теории. Часто получаемые продукты не вполне соответствуют нативным. Например, вирусные антигены, образующиеся в клетках эукариот, обычно подвергаются дополнительному гликозилированию, а в клетках бактерий этого нет. И у грибов этот процесс происходит не вполне совершенно. [17]
Возможно, функция гликопротеинов МНС по крайней мере отчасти состоит в том, чтобы наводить определенные субпопуляцин Т - клеток на подходящие дли них антигены. Для этого может быть полезна и избирательная ассоциация гликопротеннов МНС только с антигенами определенных классов. Полагают, например, что вирусные антигены вступают в ассоциацию с гликопротеинами МНС класса I и благодаря этому способны активировать цитотоксические Т - лимфоцнты. Это позволило бы объяснить, почему едва ли не все соматические клетки, обладающие ядром, имеют на своей поверхности молекулы класса I: ведь все такие клетки могут инфицироваться вирусами. Вероятно, другие антигены, например бактериальные, связываются с гликопротеинами класса II на поверхности антиген-представляющих клеток и тем самым стимулируют Т - хелперы, а те в свою очередь активируют В-клетки н макрофаги, что приводит к фагоцитозу и к уничтожению бактерий при участии комплемента. [18]
Во-первых, оно фокусирует внимание Т - лимфоцитов на клеточных поверхностях. Например, связывание цитотоксичеосими Т - клетками свободного вируса ( или растворимых вирусных антигенов) было бы неэффективно, так как рецепторы оказались бы занятыми и не могли бы разрушать инфицированные вирусом клетки. Во-вторых, оно может обеспечивать то, чтобы каждая категория антигенов вызывала иммунный ответ надлежащего типа; например, цитотоксические Т - клетки не могут обезвреживать чужеродные растворимые макромолекулы ( бактериальные токсины и т.п.) и убивать бактерии или другие микроорганизмы, поэтому способность узнавать соответствующие антигены была бы для них совершенно ненужной. [19]
Если у обследуемого не выявляются ни антитела, ни вирусные антигены, то данный индивидуум или не инфицирован, или заболевание находится в скрытом периоде. Поэтому, когда существует подозрение, через 1 - 2 недели проводят повторное обследование. Наихудший прогноз имеет место в том случае, если в крови выявляются вирусные антигены. [20]
Закономерно предположить, что клетки с анеуплоидным числом хромосом имеют антигенно измененную поверхность, и иммуноциты, воспринимая их как чужие, устраняют эти клетки. В то же время большинство цитогенетических нарушений или не вызывает изменений антигенной структуры клеточной оболочки, или эти изменения не достаточно имму-ногенны для инициации цитологической активности иммуноцитов. При вирусных инфекциях Т - лимфоциты в большинстве узнают не цитогенетически измененную клетку, а вирусные антигены, маркирующие клеточную мембрану инфицированной клетки. Цитолиз этих клеток Т - лимфоцитами ведет к неспецифическому устранению клеток с цитогенетическими аберрациями. Характерно, что В-лимфоциты и пеиммунные сыворотки крови уменьшения числа клеток с цитогенетическими нарушениями не вызывают. [21]
Об этом, по-видимому, и свидетельствует наблюдаемое нами пропорциональное снижение в зараженных культурах числа клеток с цитогенетическими нарушениями, клеток с микроядрами и появление клеточного детрита после введения в культуру гомогенных лейкоцитов, полученных от иммунных доноров. Затруднения возникают при объяснении антимутагенной активности неиммунных аутогенных Т - лимфоцитов. Возможны следующие альтернативные предположения: Т - лимфоци-ты способны определить и элиминировать клетки, имеющие на оболочке чужеродные вирусные антигены, возникшие в результате внутриклеточной жизнедеятельности вируса, или же Т - лимфоциты устраняют из культуры цитогенети-чески аберрантные фибробласты, которые имеют измененную структуру клеточной оболочки. Поскольку нельзя разграничить цитогенетические эффекты вирусной инфекции и непосредственное вмешательство вируса в биосинтез антигенной структуры оболочки клетки, то результаты приведенных выше экспериментов не позволяют дать однозначный ответ. [22]
В следующей серии экспериментов с использованием метода ИФА изучали влияние основных компонентов гипорамина в концентрации 1 мкг / мл и 5 мкг / мл на экспрессию вирусных антигенов в клетках MDCK, инфицированных вирусом гриппа А / Япония / 305 / 57 Установлено ( табл. 1), что активные компоненты гипорамина ( казуаринин и казуариктин в смеси) в концентрациях 1 мкг / мл и 5 мкг / мл оказывали на вирусную репродукцию сходный с гипорамином эффект. Добавление смеси, состоящей из казуаринина, стриктинина и изостриктинина, в концентрации 1 мкг / мл оказывало незначительное ингибирующее действие на значение OD 490, однако при увеличении концентрации этой смеси до 5 мкг / мл ингибирующий эффект на значение OD 490 возрастал до 90 % и был сходен с действием гипорамина в этой же концентрации. Полученные данные позволяют сделать вывод о том, что гипорамин и его наиболее активные компоненты ( казуаринин и казуариктин), оказывают одинаковое ингибирующее действие на репродукцию вируса гриппа А / Япония / 305 / 57 в клетках MDCK, Добавление менее активных компонентов ( смесь казуаринина со стриктинином и изостриктинином) на вирусную репродукцию снижало эффект, а неактивный компонент ( квебрахит) вообще не подавлял экспрессию вирусных антигенов в инфицированных клетках мышей. [23]
Обычно для этих целей используют метеды ингибирования БОА и ЦПД. Однако, в первом случае из-за использования агарового покрытия для получения ответа требуется несколько дней, эффект ЦПД развивается медленно, не всегда бывает убедительным и не оценивается количественно. Изложенными выше причинами объясняется все более широкое использование ИФА в химиотерапии различных инфекций. Суть метода состоит в следующем. После заражения клеток вируса на их поверхности через определенные интервалы времени начинается экспрессия вирусных антигенов, которые после фиксации клеток выявляются ИФА. Влияние различных веществ на уровень экспрессии вирусных полипептидов позволяет судить об их действии на репродукцию вируса в культуре клеток. [24]
Пожалуй, самый важный эксперимент, который помог прояснить загадку МНС, был проведен в 1974 году. Через семь дней в селезенке у этих мышей содержались активированные ци-тотоксические Т - клетки, которые в культуре ткани могли за несколько часов убить зараженные вирусом фибробласты линии X. При этом они убивали фибробласты, инфицированные только вирусом А, но не вирусом Б; следовательно, цитотоксические Т - клетки были вирус-специфичны. Ясно, что цитотоксические Т - клетки, атакуя фибробласты, узнавали не один только вирус: они узнавали еще какой-то клеточный компонент, который присутствовал иа фибробластах линии X, но не на фибробластах линии Y. Если фибро-бласты-мишени полностью отличались в генетическом отношении от инфицированных мышей, за исключением какого-либо локуса МНС класса I, то они легко уничтожались. Но если клетки-мишени отличались по этим локусам, но были идентичны по всему остальному геному с инфицированными мышами, то они не могли быть убиты. Следовательно, гликопротеины МНС класса I каким-то образом участвуют в представлении вирусных антигенов, связанных с клеточной поверхностью, цитотоксическим Т - клеткам. [26]
Страницы: 1 2