Cтраница 1
Выпадение белка в осадок в изоэлсктрической точке можно ускорить добавлением водоотнимагощих веществ ( спирта, ацетона, эфира) или танина. Одни из них ( органические растворители) уменьшают степень гидратации белковых макромолекул, разрушают их водные оболочки, другие, как, например, танин, образуют нерастворимые в воде соединения с азотистыми гетероциклическими группировками. [1]
Наблюдают выпадение белка в осадок. [2]
Горячую брагу вначале охлаждают в холодильниках из листового железа, где одновременно происходит выпадение белков и остатков хмеля, которые применяются для различных целей. После этого брага охлаждается в оросительных холодильниках. [3]
Малоселективными являются классические методы высаливания белков, когда растворимость белка понижается путем добавления соли, чаще всего сульфата аммония, в результате чего начинается выпадение белка из раствора. Так как растворимость различных белков зависит от концентрации соли несколько по-разному, то с помощью сульфата аммония производится частичное фракционирование белковых смесей. [4]
Так как в изоэлектрическом состоянии по всей длине белковой молекулы расположено равное количество кислотных и основных групп, гибкая макромолекула белка в результате взаимодействия разноименных зарядов свертывается в клубок, а это способствует выпадению белка в осадок. Изоэлектрическая точка большинства белков лежит в слабокислой среде, поэтому для более полного осаждения их растворы подкисляют. При избыточном добавлении кислоты аминокислоты ведут себя как основания: диссоциация карбоксильных групп подавляется, а аминогруппы приобретают положительный заряд ( см. стр. Между отдельными частями молекулы возникают силы отталкивания, и молекула развертывается в цепь, что препятствует осаждению белка. В щелочной среде молекула белка несет отрицательный заряд и также стремится развернуться. Поэтому добавление к белку щелочи препятствует его осаждению. [5]
Исследования показали, что положение ионов в лиотропных рядах определяется степенью их гидратации: чем сильнее гидра-тированы ионы данной соли, тем больше воды связывает электролит, тем меньше остается воды, способной растворять другие вещества. Выпадение белка в присутствии соли происходит в результате уменьшения количества свободной воды, так как вода, связанная с ионами соли, не является растворителем. [6]
Концентрированные минеральные кислоты вызывают денатурацию белка. Выпадение белка в виде осадка связано с денатурацией белковых частиц и образованием комплексных солей белка с кислотами. Ортофосфорная кислота осадка не дает. В избытке всех минеральных кислот, за исключением азотной, выпавший в осадок белок растворяется. Эта качественная реакция с концентрированной азотной кислотой лежит в основе количественного определения белка в моче по методу Робертса-Стольникова - Брандберга. [7]
В одну пробирку прибавляют 2 - 3 капли раствора таннина, в другую - 5 - б капель раствора пикриновой кислоты. Наблюдают выпадение белка в осадок. [8]
Подготовленную указанным способом мочу погружают на 30 - 40 мин в кипящую водяную баню. После свертывания и выпадения белка в виде хлопьев пробу оставляют до следующего дня для отстаивания осадка протеината ртути. На следующий день надосадочную жидкость осторожно сливают или отсасывают водоструйным насосом, а осадок количественно, с помощью остатка мочи переносят в широкие центрифужные пробирки и центрифугируют 20 мин при 2000 об / лшн. Надосадочную жидкость сливают к соединенным в широкой пробирке осадкам, постоянно помешивая, приливают 10 мл раствора Люголя № 2 и пробирку закрывают пробкой. Через 2 ч пробу повторно центрифугируют в течение 20 мин; 5 мл надосадоч-ной жидкости, содержащей раствор ртути в растворе Люголя, сливают в обычную центрифужную пробирку, куда затем приливают 3 мл двойного раствора, и пробирку встряхивают. [9]
К 2 - 3 мл раствора белка добавляют по каплям, при встряхивании, концентрированную уксусную кислоту. Во всех растворах ( кроме раствора желатина) наблюдается выпадение белка в осадок в виде мути или хлопьев. При дальнейшем добавлении кислоты осадок белка снова растворяется. [10]
К 2 - 3 мл раствора белка добавляют по каплям при встряхивании концентрированную уксусную кислоту. Во всех исследуемых растворах ( кроме раствора желатина) наблюдается выпадение белка в осадок в виде мути или хлопьев. При дальнейшем добавлении кислоты осадок белка снова растворяется. [11]
Наливают в цилиндры по 100 мл раствора яичного белка. В один ялиндр приливают из капельной воронки при встряхивании уксусную клоту; при этом наблюдается выпадение белка в виде мути или топьев. При дальнейшем добавлении кислоты осадок снова растворяется. [12]
При смешивании раствора белка с буферной смесью, рН которой соответствует изоэлектрической точке белка, частицы белка изменяют свой заряд, становятся электронейтральными и, следовательно, неустойчивыми в растворе. Добавление водоотнимающих средств, например спирта, ацетона, вызывает дегидратацию белковых частиц и способствует выпадению белка в осадок. [13]
После растворения желатины при осторожном нагревании в среде устанавливают слабощелочную реакцию ( как и для МПБ и МПА), кипятят в течение 5мин, затем охлаждают до 40 - 50 С. Одновременно яичный белок взбивают с небольшим количеством воды, вливают его в охлажденную желатиновую среду, хорошо взбалтывают и снова нагревают. Среда после выпадения белков становится прозрачной. Ее фильтруют через горячую воронку, разливают в пробирки и стерилизуют в кипятильнике Коха текучим паром, прогревая среду по 30 мин через 24 ч 3 раза. [14]
Реакция Николаева основана на идентификации величины белковой корпускулы по способности выпадать в осадок при определенной концентрации сульфата аммония. Известно, что чем больше относительная молекулярная масса белковой молекулы, тем при меньшем насыщении соли она выпадает в осадок. Антитела и антигены любой специфичности и природы будут иметь корпускулы меньшей относительной молекулярной массы, чем образуемые при их взаимодействии иммунные комплексы, состоящие не менее чем из 2 молекул. Следовательно, выпадение белков в такой системе будет происходить при добавлении меньшего количества химического реагента, чем в случае, когда реакция антиген - антитело не произойдет. Если при достижении некоего объема раствора соли муть появится лишь в опытных пробирках, но будет отсутствовать в контрольных, реакцию считают положительной, а разведение сыворотки принимают за титр. В реакции используют сыворотки и их разведения в объеме 1 мл ( реже 0 5 мл), а антиген в объеме 0 1 мл. Добавление сульфата аммония начинают через 2 - 3 мин после тщательного смешивания антигена с сывороткой. [15]