Es-клетка

Cтраница 1

После трансфекции ES-клеток этим вектором проводят скрининг трансфицированных клеток методом ПЦР. Один из ПЦР-праймеров ( Р1) комплементарен участку клонированной бактериальной или синтетической ( уникальной) нуклеотидной последовательности интегрировавшего вектора, а второй ( Р2) - участку хромосомной ДНК, прилегающему к одному из гомологичных участков ДНК. [1]

Эмбриональные стволовые клетки, ES-клетки ( Embryonic stem ceDs) Клетки из эмбрионов на стадии бластоци-сты, способные к дифференцировке в любые типы клеток, в том числе и в клетки зародышевой линии, при введении в другой эмбрион на стадии бластоцисты. [2]

Более простой способ идентификации ES-клеток, несущих трансген в нужном сайте, основан на использовании ПЦР. [3]

Никаких специфичных для птиц ES-клеток не обнаружено, поэтому подход, основанный на их использовании, для птиц неприменим. Более перспективным представляется метод с использованием рекомбинантных эмбриональных клеток. Он состоит в следующем. Часть потомков будет нести в каком-то небольшом количестве клетки донора; таких животных называют химерами. У некоторых химер клетки, произошедшие от трансфицированных клеток, могут образовывать линии зародышевых клеток, и после нескольких раундов скрещиваний таких химер можно получить линии трансгенных животных. Под действием облучения некоторые ( но не все) клетки бластодермы погибнут, и соотношение между трансфицированными клетками и клетками реципиента увеличится в пользу первых. [4]

Мышата, у которых генетически модифицированные ES-клетки участвовали в образовании клеток зародышевой линии, могут дать начало трансгенным линиям. Для этого их нужно скрестить с особями той же линии, а затем скрестить их трансгенных потомков. В результате будут получены трансгенные мыши, гомозиготные по трансгену. [5]

Таким образом можно идентифицировать пулы ES-клеток, содержащих трансген в нужном сайте, а пересевая клетки из этих пулов - получить клеточные линии с сайт-специфической вставкой. [6]

Трансгенных мышей получали микроинъекцией в пронуклеус оплодотворенной яйцеклетки или трансфекцией ES-клеток с помощью YAC, несущих несколько родственных генов или один большой ген. [7]

ДНК встраивается случайным образом, в других встраивание происходит в нужный сайт, в большинстве же ES-клеток интеграции вообще не происходит. Для увеличения числа клеток первого типа используют так называемую позитивно-негативную селекцию. Эта стратегия состоит в позитивной селекции клеток, несущих векторную ДНК, встроившуюся в нужный сайт, и негативной селекции клеток с векторной ДНК, интегрировавшей в случайный сайт. [8]

Нокаут гена с помощью направленной гомологичной рекомбинации. Вектор несет селективный маркерный ген ( smg и фланкирующие его последовательности, гомологичные соответствующим участкам гена-мишени. Последний содержит пять экзонов ( 1 - 5. В результате гомологичной рекомбинации ( штриховые линии ген-мишень прерывается ( нокаутируется. [9]

В принципе подходы к созданию трансгенных животных с улучшенными функциями и с потерей функций сходны. К сожалению, плю-рипотентные ES-клетки, аналогичные таковым у мышей, пока не обнаружены у крупного рогатого скота, овец, свиней и цыплят, но их поиск продолжается. [10]

Показано, что, например, ES-клетки доступны культивированию in vitro и после каких-либо манипуляций ( например, после введения клонированных генов путем инфекции или трансфекции) можно инъецировать их в бластоцисту и вернуть в живой макроорганизм. ES-клетки колонизируют эмбрион и составляют с ним единое целое, хотя колонизация ими зародышевого пути по разным причинам удается не всегда. Последующие этапы работы с трансгенными животными во многом сходны с. [11]

Страницы: 1