Cтраница 2
Успешное масштабирование градиентных систем требует просто разумного подхода с учетом некоторых рекомендаций, предложенных в этой главе для изократического и ступенчатого градиентного препаративного ЖХ-разделения. Следует позаботиться о воспроизводимости наклона или формы градиента, учитывая любые различия в геометрии колонки ( длина, объем), химическую природу насадки ( разд. Непрерывный градиент изменяет значение k известным образом по зависимости, аппроксимируемой серией небольших изократических ступеней. Увеличивающаяся сила растворителя в течение элюирования сжимает полосу образца. [16]
Уже одно перечисление причин размывания зоны показывает, насколько сложны диффузионные и кинетические процессы в колонке. Неопределенность геометрии колонки мешает применению чисто молекулярно-кинетиче-ской трактовки происходящих явлений. [17]
Перечисленные причины размывания хроматографических полос обусловлены сложностью диффузионных и кинетических процессов в колонке. Эта неопределенность геометрии колонки препятствует применению молекулярно-кинети-ческой теории для объяснения явлений, происходящих в колонке. [18]
Времена удерживания и все производные от них величины являются по существу термодинамическими характеристиками процесса. Однако, как в любом другом химическом процессе, в хроматографии результат определяется совместным влиянием факторов термодинамического и кинетического типа. Если в хроматографической системе данного состава при данной температуре у двух веществ значения tR одинаковы ( или ос1 0), то никакое изменение геометрии колонки, расхода элюента и других параметров не приведет к успешному разделению этой пары. Но, с другой стороны, различие значений tR вовсе не означает автоматически, что разделение, а тем более хорошее, будет достигнуто. Для этого используемая колонка должна обладать достаточно высокими кинетическими характеристиками. [19]
Времена удерживания и все производные от них величины являются по существу термодинамическими характеристиками процесса. Однако, как в любом другом физико-химическом процессе, в хроматографии результат определяется совместным влиянием факторов термодинамического и кинетического типа. Если в хроматог-рафической системе данного состава при данной температуре у вещества 1 и 2: начения гд одинаковы ( или 051), то никакое изменение геометрии колонки, расхода ПФ и других параметров не приведет к успешному разделению этой пары компонентов. Различие значений 1К в данном случае также не гарантирует возможности добиться хорошего разделения. Колонка должна обладать высокими кинетическими характеристиками, акты сорбции - десорбции должны совершаться с достаточно быстрой скоростью, чтобы реализовать потенциальную возможность: ( х) ектив1юго разделения. [20]
Для обеспечения идентичности теплового режима колонок используются воздушные термостаты с возможно меньшим градиентом температуры в зоне расположения колонок. Идентичность газового режима достигается подбором элементов установки и регулирования расходов с близкими динамическими характеристиками. Чувствительность детекторов ДИП уравнивается соответствующей корректировкой расходов водорода в каждой горелке. Наконец, равенство количества неподвижной фазы в колонках достигается одинаковой геометрией колонок и контролем массы ( а не объема) сорбента при заполнении колонок. Подготовка двухколоночной схемы к работе должна заканчиваться балансированием по результатам записи нулевой линии в холостом ( без введения пробы) цикле программирования температуры. Оно состоит в таком направленном изменении рабочих параметров ( главным образом, расхода газа-носителя в сравнительной колонке), которое приводит к уменьшению сигнала разбаланса при конечной температуре цикла. [21]
В большинстве случаев перед хроматографическим процессом стоит задача надежного разделения двух или более заранее известных компонентов исходной смеси. Если хроматографическая система уже определена, то в распоряжении экспериментатора еще остается возможность выбора целого ряда физических параметров процесса с целью оптимизации условий разрешения зон ( пиков) в этой системе. Последовательно рассмотрим следующий ряд параметров: геометрия колонки, размер гранул, набивка колонки, скорость элюцпп, физические свойства элюента ( вязкость, температура) и, наконец, загрузка колонки. [22]
Геометрия колонок, концентрация и общее содержание аффинного лиганда - вот три основных параметра, которые определяют и связываемость, и емкость носителя. Для систем с высокой аффинностью высота колонки с аффинным сорбентом, содержащим высокие концентрации лиганда, мало влияет: связываемость зависит от концентрации аффинанта, а не от высоты колонки. Это имеет практическое значение: колонки, содержащие высокие концентрации лиганда, можно использовать для концентрирования разбавленных растворов ферментов. Кроме того, в системах с высокой аффинностью, в которых элюирование адсорбированных макромолекул без денатурации затруднено, разбавление аффинного сорбента немодифицированным гелем или уменьшение концентрации лиганда может способствовать элюированию в более мягких условиях. В некоторых случаях, конечно, фермент различает только концентрацию лиганда в гранулах модифицированного геля, которая, однако, не меняется при разбавлении. Для взаимодействий систем с низкой аффинностью очень важна геометрия колонки. Для разделения специфически адсорбированных белков от неадсорбированных наиболее выгодно использовать длинные колонки, а не короткие. [23]