Cтраница 1
Гидразиды аминокислот удаляют реакцией с бензальдегидом, изо-валериановым и другими альдегидами, а находящуюся в водной фазе С-концевую аминокислоту анализируют методами хроматографии или электрофореза на бумаге и в тонком слое или с помощью аминокислотного анализатора. [1]
Пептидные связи расщепляются с образованием гидразидов аминокислот, а С-концевые остатки отщепляются в виде свободных аминокислот. [2]
Из схемы видно, что вся цепь распадается на гидразиды аминокислот, кроме первой ( с С-конца) аминокислоты, которая выделяется в свободном виде. После обработки полученной смеси подходящим альдегидом, связывающим гидразиды в малорастворимые гидразоны, свободную аминокислоту выделяют хроматографически. [3]
Обрабатывая полученную смесь каким-нибудь альдегидом, например энантолом, гидразиды аминокислот превращают в соответствующие гидразоны, легко отделяемые от незамещенной аминокислоты, которая идентифицируется хроматографиче-ски. [4]
До настоящего времени этот метод остается наиболее распространенным для синтеза гидразидов аминокислот и пептидов, в методику внесено много усовершенствований. При низкой температуре снижается также риск перегруппировки азида по Кур-циусу. [5]
По более усовершенствованной методике отщепившиеся аминокислоты превращают путем динитрофенилирования в соответствующие ДНФ-производные, а гидразиды аминокислот - в ди - ДНФ-лроизводные. Например, 1 мкмоль белка гидролизуют примерно с 1 г безводного гидразина ( 99 - 100 %) при 100 в течение 5 - 10 час. Смесь осторожно упаривают в вакууме над концентрированной серной кислотой, остаток растворяют в 15 мл 2 % - ного раствора бикарбоната Na или 0 2 / И фосфатного буфера, рН 8, и добавляют раствор 0 3 мл ФДНБ в 30 мл этанола. Реакционную смесь встряхивают в течение 2 час в темноте при комнатной температуре, добавляют 45 мл воды и раствор подкисляют разведенной соляной кислотой. ДНФ-производные экстрагируют этилацетатом, а затем из этилацетата кислые ДНФ-производные извлекают 2 % - ным раствором бикарбоната. Производные С-концевых аминокислот, а также глутаминовой и аспарагиновой кислот осаждают из водного раствора при подкислении разбавленной кислотой, снова экстрагируют этилацетатом и хроматографируют на силикагеле. [6]
При кипячении с безводным гидразином ( 100 С, 5 ч) все аминокислоты, за исключением С-концевой, превращаются в гидразиды. Отделение значительного избытка гидразидов аминокислот осуществляется реакцией с изовалериановым ( или другим) альдегидом. [7]
Обработка пептидов или белков гидразином при 101Р в течение 3 - 10 часов приводит к расщеплению всех пептидных связей. При этом все аминокислоты, кроме С-концевых, превращаются в соответствующие гидразиды аминокислот, которые с бензальдегидом образуют гпдразоны, растворимые в органических растворителях. Это используется для отделения их от С-концевых аминокислот, остающихся неизмененными. [8]
Обработка пептидов или белков гидразином при 100 в течение 3 - 10 часов приводит к расщеплению всех пептидных связей. При этом все аминокислоты, кроме С-концевых, превращаются в соответствующие гидразиды аминокислот, которые с бензальдегидом образуют гидразоны, растворимые в органических растворителях. Это используется для отделения их от С-концевых аминокислот, остающихся неизмененными. [9]
Метод основан на открытии Акабори с сотрудниками [13], которые показали, что при обработке белка безводным гидразином С-кон-цевые аминокислоты отщепляются в свободном виде. Все другие аминокислоты, участвовавшие в образовании пептидных связей, превращаются в гидразиды аминокислот, которые могут вступать в реакцию конденсации с бензальдегидом с образованием дибензаль-ных производных, нерастворимых в воде. [10]
Как известно, для синтеза гетероциклических соединений часто с успехом применяются гидразиды кислот. Поэтому нами для синтеза целевых триазинонов были намечены два способа на основе гидразидов замещенных аминокислот. [11]
Ряд усовершенствований разработан в синтезе гидразидов пептидов. Поскольку скорость реакции гидразинолиза резко падает нри увеличении длины пептидов, было предложено сначала синтезировать защищенные гидразиды аминокислот ( 26) м попользовать их для наращивания пептида. [12]
Обычно шиффовы основания настолько нестабильны, что не могут быть использованы в качестве защитных групп. Тем не менее в некоторых случаях группировки такого типа находят применение для блокирования Н21 - функции аминокислот. Кроме того, гидразиды аминокислот и пептидов выделяют иногда в виде бензилиденовых и изопропилиденовых производных ( [642, 2173, 2719]; ср. Совсем недавно описано несколько карбонильных соединений, образующих с аминокислотами устойчивые азометиновые производные; эти производные можно использовать в качестве М - защитных групп в синтезе пептидов. [13]
Реакция с безводным гидразином является единственным химическим методом определения С-концевых аминокислот, который во многих случаях дает достоверные результаты. Два остальных метода - восстановление гидратами металлов и тиогидантоиновый метод - дают, как правило, невоспроизводимые и недостоверные результаты. Метод предложен Акабори в 1952 г. Белок нагревают с гидразином ( безводным) в запаянной ампуле при 100 - 120 в течение 8 - 10 часов. При зтом происходит расщепление белка-гидразинолиз, в результате чего все аминокислоты, кроме С-концевой, образуют гидразиды. Обработкой бензальдегидом гидразиды аминокислот переводят в нерастворимые производные, которые удаляют фильтрованием. Свободные же С-концевые аминокислоты определяют хроматографически. [14]