Гидрохлорид - гуанидин
Cтраница 1
Гидрохлорид гуанидина сплавляют в пробирке на голом огне до прекращения интенсивного выделения аммиака. [1]
Титрование проводят в растворе бензола с гидрохлоридом гуанидина ( как протеиновое денатурирующее средство) или с глицином - цитратным буферным раствором ( рН9 7), для стабилизации окраски индикатора нитропруссида2 добавляют цианид калия. [2]
Этот метод обнаружения гуанидина рекомендован для исследования только гидрохлорида гуанидина, но не его сульфата. Он основан на образовании из гуанидина гуанилгуанидина и получении медной соли, обладающей характерной окраской. [3]
Туг-35, тетранитрометаном не влияет на токсичность. Второй остаток, Туг-25, по-видимому, утоплен в белковой глобуле, но в присутствии гидрохлорида гуанидина может быть пронитрован, что приводит к потере активности. Поскольку этот остаток погружен в белок, он, вероятно, не взаимодействует с холинэргическим рецептором, но важен для поддерживания правильной конформации молекулы токсина. Вблизи рецептора располагаются или вступают во взаимодействие, по-видимому, боковые радикалы сразу нескольких аминокислотных остатков и модификация некоторых из них не может в достаточной степени пролить свет на механизм действия токсина. Проведен твердофазный синтез токсина кобры [28]; возможно, что синтез аналогов с природными или неприродными аминокислотами, замещающими остатки в определенных участках молекулы, позволит получить ценную информацию о взаимосвязи между структурой и токсичностью. [4]
Это указывает на то, что воздействие концентрированных растворов солей на белки осуществляется в основном путем стабилизирующего или дестабилизирующего влияния на амидные группы, у которых изменяется степень доступности для растворителя при изменении физического состояния белка. Те соли, которые способствуют денатурации, растворению и диссоциации белков, а именно LiBr, Nal, NaSCN, СаС12, гидрохлорид гуанидина и дииодо-салицилат лития, увеличивают растворимость упомянутого выше модельного полиамида и, следовательно, должны благоприятствовать таким изменениям в состоянии белка в растворе, при которых происходит увеличение степени контакта амидных групп с растворителем. Наоборот, соли, препятствующие денатурации и способствующие осаждению и агрегации белков, такие, как сульфаты, фосфаты, ацетаты, фториды и цитраты, понижают растворимость ЭЭАТГ, и в их присутствии уменьшается степень контакта амидных групп с растворителем. Выражаясь более формально, соли первой группы уменьшают коэффициент активности амидных групп, находящихся в контакте с растворителем, и, согласно уравнению ( 1), увеличивают концентрацию развернутого белка, в котором присутствует большое число таких групп; соли второй группы вызывают противоположный эффект. [5]
После того как белок связан с лигандом и примеси удалены, проводят специфическое или неспецифическое элюирование сорбированной макромолекулы. Неспецифические методы элюи-рования предусматривают изменение ионной силы, рН, диэлектрической проницаемости буферного раствора либо введение денатурирующих агентов, например мочевины или гидрохлорида гуанидина. Все эти методы направлены на уменьшение сродства белка к лиганду в результате конформационных изменений последнего. Предполагается, что после такой обработки белок сохраняет способность ренатурировать. Специфические методы элюирования обычно включают конкуренцию какого-то другого лиганда или белка, подобного выделяемому, за центр связывания. [6]
Свертывание пируваткиназы обеспечивается L-валином. Пируваткиназа [467] - это тетрамерный фермент, построенный из четырех идентичных субъединиц, каждая из которых содержит одну молекулу невалентно связанного L-валина. Субъединицы диссоциируют и развертываются при действии 6 М гидрохлорида гуанидина. При выдерживании в ренатурирующей среде L-валин служит специфичным инициатором процесса повторного свертывания. Он индуцирует ренатурацию с константой скорости псевдопервого порядка по отношению к мономеру, а это означает, что ь-валин влияет на свертывание мономерной формы в ее нативную конформацию и что завершающим процессом является спонтанное образование тетрамерного фермента. [7]
 |
Пространственная модель ди-мера цитохром - с-редуктаэы в мембране. [8] |
В некоторых случаях денатурацию вызывает весьма незначительное изменение рН среды. Одни белки стабильны при кислых значениях рН ( например, пепсин), другие - при щелочных ( щелочные протеиназы), третьи - при нейтральных. Часто для денатурации белков используют 8М раствор мочевины или 6М раствор гидрохлорида гуанидина. [9]
Это значит, что такие денатурирующие агенты взаимодействуют в растворе с тетрапептидом, моделирующим амидные группы полипептидной цепи, понижая его энергию. Этот эффект уменьшается при замещении атомов водорода денатурирующего агента алкильными группами, и тетралкилмочевина и гидрохлорид тетраметилгуанидина вызывают уже уменьшение растворимости ЭЭАТГ. Так как алкилирование приводит к возрастанию солюбили-зирующей способности мочевины и гидрохлорида гуанидина по отношению к неполярным молекулам [33], то их взаимодействие с пептидом не может быть по своей природе гидрофобным. Проще всего это можно объяснить тем, что денатурирующий агент взаимодействует с пептидными группами с образованием водородных связей. [10]
При хроматографии и электрофорезе белков использование органических растворителей исключается из-за их денатурирую щего действия, в результате которого белки переходят в нерас творимое состояние. Подобное действие могут оказывать и некоторые органические соединения. Поэтому при разделении белков необходим тщательный выбор селективных водных буферных систем. Однако необходимость солюбилизации белков, в особенности тех из них, которые ассоциированы с биологическими мембранами, привела к введению детергентов - как ионных, так и неионных, а также таких реагентов, как мочевина и гидрохлорид гуанидина, которые разрывают водородные связи и препятствуют гидрофобным взаимодействиям. Даже будучи денатурированными, многие белки остаются растворимыми в присутствии этих соединений, особенно после расщепления ди-сульфидных связей дитиотретиолом или меркаптоэтанолом. [11]
Страницы: 1