Cтраница 1
Гомогенат печени помещают в химический стакан вместимостью 50 - 100 мл. Для равномерного нагревания содержимое стакана непрерывно перемешивают. [1]
В полученном гомогенате печени определяют концентрацию и удельную активность аргиназы ( см. работу 24), а оставшуюся часть используют для дальнейшей очистки фермента. [2]
Гидролиз ацетиона гомогенатом печени мышей исследован О Брайном и др. [79], причем было показано, что главным продуктом является соответствующая карбоновая кислота ( ацетионовая кислота); в небольших количествах обнаружены также диэтил-дитиофосфат и неизвестное соединение с выраженными полярными свойствами. [3]
При инкубации с гомогенатом печени крыс () - мевалоновая-2 - С14 кислота превращается в холестерин с большей скоростью, чем ацетат-ион, и почти с количественным выходом. Если исходить из рацемической мевалоновой кислоты, то выход получается вдвое меньше; ферменты превращают лишь один из антиподов. Мевалоновая кислота была внедрена биохимическим путем также в моно - и тритерпены, сквален, каротиноиды и каучук, причем тем самым было доказано, что она является существенным промежуточным продуктом в биосинтезе всех изопреноидов. [4]
При инкубации с гомогенатом печени голубя он полностью превращается в гипоксантин [18, 19], причем на каждый 1 моль синтезированного пурина включается 1 моль формиата. Было также показано, что АИКА превращается в ИМФ еще до того, как последний под действием фермента становится гипоксан-тином. [5]
Удобным объектом для определения активности аргиназы является гомогенат печени животных или экстракт из ацетонового порошка этой ткани. [6]
Фермент локализован в гиалоплазме, поэтому в качестве источника используют безмитохондриальный гомогенат печени крысы. Для проявления ферментативной активности необходимы ионы Mg2 - u или Мп, оптимум водородного показателя сильно зависит от концентрации активирующих ионов и природы буфера. [7]
Гомогенат печени крысы получают, как описано на с. Супернатант фильтруют через четыре слоя влажной марли и хранят до опыта в холодильнике. [8]
Аликвот прозрачного фильтрата, содержащий 5 - 200 цг гликогена, отмеривают в пробирку 26 X 200 мм из теплостойкого стекла. Если это 1 % - ный гомогенат печени, то берут 0 2 - 0 5 фильтрата и доводят водой до 1 5 мл. Пробирку вращают, сначала осторожно, потом сильнее, пока содержимое не перемешается и антроновый реактив не растворится в общем объеме. [9]
В настоящее время в номенклатуре эстераз царит беспорядок главным образом потому, что большинство эстераз чаще всего неспецифично. Так, хотя мы могли бы ( но не будем) определить ароматические эстеразы, как эстеразы, обладающие высоким сродством преимущественно к субстратам, спиртовая часть которых является фенолом, мы допустили бы ошибку, если бы квалифицировали расщепление фенилацетата гомогенатом печени как результат действия ароматической эстеразы. Вероятно, в этом случае небольшая группа ароматических эстераз работала бы совместно с другими ферментами, хотя их специфические субстраты могли быть совершенно иными. [10]
Ранние исследования Ван Тамелена [210] показали, чтосква-лен может быть превращен химическим путем в 2 3-бромгидрин обработкой бромноватистой кислотой в водном растворе глима. Кроме того, при обработке сквалена М - бромсукцинимидом ( NBS) в воде селективно образуется желаемый конечный бром-1. Обработка основанием в этаноле приводит к образованию сквален-2 3-оксида. При использовании гомогената крысиной печени в стандартных аэробных условиях рацемический сквален-2 3-оксид в конечном счете дает стериновые фракции, которые могут быть очищены хроматографически. [11]
Добавление танацехола в образцы гомогената печени, обработанные аскорбатом железа, уменьшало содержание в них МДА. [12]
Ацилирующие двууглеродные фрагменты, из которых синтезируются высшие жирные кислоты, могут доставляться не только ацетатами и ацетил-ацетатами, но также пировшюградной кислотой. В некоторых работах было найдено, что ацетаты могут участвовать в метаболических превращениях без промежуточного образования ацетилацетатов. Между тем, образование ацетоуксусной кислоты должно было бы вести к потере D в результате как окисления р-углерода, так и энолизации, при которой D переходит в связь с кислородом, где он легко обменивается с водой. Низшие жирные кислоты с С14 в карбоксиле дают с гомогенатом крысиной печени ацето-уксусную кислоту, в которой С14 остается в карбоксиле. [13]
В определенных условиях ( в печени свиньи) биохимическое превращение сквалена может быть приостановлено на стадии ланостерина. Было доказано ( применением Н2018), что НО-группа ланостерина происходит из воды, служащей растворителем. Сначала отщепляется СН3 от С-14, причем образуется И-десметилланостерин, от которого далее отщепляются два других метила с сбразованием зимостерина. Этот стерин имеет ту же стери-ческую конфигурацию при всех асимметрических атомах, что и ланостерин и холестерин, и содержит двойную связь в том же положении С-8 - С-9, что и ланостерин. Зимостерин синтезируется дрожжами из ацетата и гладко превращается in vivo ( крысами) и in vitro ( гомогенатом печени) в холестерин. Таким образом, живые организмы обладают ферментами, необходимыми для всех этих превращений. [14]
По окончании хроматографирования лист бумаги помещали на фотопластинку, на которой после соответствующей экспозиции и проявления получалась радиоавтография, наглядно показывающая распределение по площади листка бумаги содержащих иод веществ. Удалось установить, что гомогенат печени трансформирует лизин в ос-аминоадипиновую кислоту. [15]