Дансилхлорид

Cтраница 1

Дансилхлорид ( 1-диметиламинонафталин - 5-сульфонилхлорид) обладает сильной флуоресценцией. Он дает с аминокислотами производные, которые можно обнаружить и измерить даже в очень небольших количествах. [1]

Дансилхлорид также реагирует с - SH, тиро-зиновым - ОН, - NH2 лизина и ими-дазольньш азотом гистидина; тиоль-ные и нмидазольные производные неуст. [2]

ДАНС 132 Дансилхлорид 132 Датисцетин 110 Декагидронафталин 111 Джиббса реактив 148 Диазоли 113 ел. [3]

Помимо а - и е-аминогрупп дансилхлорид вступает в реакцию с ОН-группами тирозина, SH-группами цистеина и имидазольными кольцами гистидина ( два последних соединения неустойчивы при щелочных значениях рН), а также с аммиаком, растворенным в воде. После окончания реакции дансилирования модифицированный белок или пептид подвергают кислотному гидролизу. [4]

Аминогруппы белков и пептидов реагируют с флуоресцентным красителем диметиламинонафталинсульфонилхлоридом ( сокращенно дансилхлорид) в щелочной среде. Как и при динитрофенилиро-вании, связь аминокислоты с реагентом не разрушается при гидролизе, и поэтому ДНС-аминокислоты можно идентифицировать в гидролизатах дансилированного белка ( ДНС-белок) или пептида. Такие гидролизаты содержат a - ДНС-аминокислоты, образовавшиеся из N-концевыхаминокислот, и s - ДНС-Лиз и О-ДНС-Тир, образовавшиеся из остатков Лиз и Тир, расположенных внутри цепи. [5]

Особо чувствительный метод двойной метки основан на применении меченого [ 3Н ] - дансилхлорида в качестве реагента и меченой [ 4С ] - аминокислоты как внутреннего стандарта. Отношение 3Н: 14С в дансильном производном зависит от отношения количества добавленной [ 14С ] - аминокислоты к концентрации немеченой аминокислоты в пробе. Этот метод особенно подходит для идентификации аминокислот в биологическом материале. [6]

Введение метки в аминоконцевой остаток трипептида с помощью дансилхлорида. После гидролитического расщепления всех пептидных связей дансильное производное аминоконцевой аминокислоты можно выделить и идентифицировать. Благодаря интенсивной флуоресценции дансильных групп они выявляются в значительно меньших количествах, чем динитрофенильные группы. Поэтому дан-сильный метод по чувствительности намного превосходит метод с использованием фтордини-тробензола. [7]

Другим реагентом, используемым в качестве метки, позволяющей идентифицировать N-концевой остаток, служит дансилхлорид ( рис. 6 - 7), который реагирует со свободной - аминогруппой и дает дансильное производное. Последнее интенсивно флуоресцирует, вследствие чего его можно обнаружить и измерить при значительно более низких концентрациях, чем динитрофенильные производные. [8]

Так, используя дансилхлорид, меченный 14С, и проводя разделение на слоях полиамида [125], для количественного определения этих производных в области 10 - 14 М можно воспользоваться авторадиографией или сцинтилляционным счетом. Дроверт и др. [257] анализировали динитрофенил-аминокислоты, меченные 14С, пропитывая хроматограммы тонкой пленкой коллодия, удаляя пленку и измеряя затем радиоактивность пятен. [9]

Значение Rf фенилтиогидантоиновых производных аминокислот. [10]

При анализе концевых аминокислот часто применяют дансилпроизводные аминокислот. Их получают обработкой растворов аминокислот дансилхлоридом в ацетоне при рН 9 5 в 0 05 М боратном буфере. [11]

Мак-Нейл и Хикичи [113], измеряя интенсивность флуоресценции in situ, нашли на вишнях беномил [ метил-1 - ( бутилкар-бамоил) бензимидазол-2 - илкарбамат ], а Фрей и др. [114] тем же методом обнаружили нанограммовые количества севина, который они предварительно гидролизовали до нафтола. Другие карбаматы также можно гидролизовать, а затем обработать дансилхлоридом, чтобы получить флуоресцирующие производные. [12]

Число метчиков, применяемых в настоящее время для изучения конформации сложных молекул, очень велико. К наиболее употребительным относятся акридиновый оранжевый, профлавин, 1-ани-линонафталин - 8-сульфокислота. Для ряда задач используются некоторые из флуорохромов, применяемых для количественного анализа, в первую очередь дансилхлорид и флуоресцеинизотиоцианат. Достоинством метчиков с активной группой является то, что точна известно место их локализации в биополимере. Это значительно упрощает интерпретацию получаемых результатов. [13]

Остаток нагревают 17 ч при 100 С в запаянной трубке с безводным гидразином. Избыток гидразина удаляют при пониженном давлении, а остаток обрабатывают 0 3 мл 0 2 М раствора буфера-цитрата натрия ( рН 3 0) и 5 - 10-кратным избытком дансилхлорида ( масса / объем) в 0 3 мл этанола. [14]

Для обнаружения чаще других используют хорошо известный реактив Драгендорфа или его модификации. Вагюифалви [31] применял разбавленный 1: 4 раствор этого реактива. К числу обнаруживающих реактивов относятся также дансилхлорид, реактив Вагнера, раствор четы-рехазотирова-нного бензидина [32], сульфат церия-аммония [23], реактив Мунье [34], ферроцианид калия [35], реактив Ван Урка [36], смесь хлорной кислоты с хлоридом железа ( III) [37] и иодоплатинат [38], а также многие другие. [15]

Страницы: 1 2