Дезоксирибонуклеаз
Cтраница 2
 |
Пирограммы различных белков, полученные на колонке. [16] |
Ппрограммы исследованных белков отличаются между собой так. Так, например, не составляет большого труда обнаружить различие в пирограммах рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы. [17]
Особое значение ферменты животного происхождения имеют в медицине. Например, из поджелудочной железы крупного рогатого скота получают препараты трипсина, химотрипсина, рибону-клеазы, дезоксирибонуклеазы, частично амилазы и липазы; из слизистой оболочки желудка свиней - препараты пепсина; из семенников крупного рогатого скота - препараты гиалуронидаз-ного действия. [18]
Обычно рибонуклеазу выделяют из свежей бычьей поджелудочной железы. Затем добавляют сернокислый аммоний до 0 6 насыщения, переводя в осадок трипсиноген, химотрипсиноген и дезоксирибонуклеазу. Рибонуклеазу осаждают из фильтрата, повышая концентрацию сернокислого аммония до 0 8 насыщения. [19]
Если эту эндогенную затравку разрушить рибонуклеазой, которую затем можно удалить с помощью бентонита, то активность изучаемого фермента оказывается сильно ингибированной, в то время как активность ДНК-зависимой РНК-полимеразы в этих условиях не меняется. Добавление же дезоксирибонуклеазы не действует на РНК-зависимую РНК-поли-меразу, но угнетает ДНК-зависимый синтез. Более того, обе ферментные системы отличаются по оптимуму рН и потребности в различных ионах. ДНК-зависимая ферментная система имеет оптимум рН около 7 5; при этом ее действие усиливается добавлением меркаптоэтанола и ионов марганца. РНК-зависимый фермент активнее всего при рН 9 5, но в этих условиях ионы марганца м меркаптоэтанол подавляют его активность. [20]
Дизамещенные фосфаты гидролизуются фер ( ментами фосфо-диэстеразами. Некоторые из них неспецифичны, но большинство участвует в шдролизе нуклеиновых кислот и называется нуклеаза-ми. Существуют рибонуклеазы и дезоксирибонуклеазы ( гл. Экзонуклеазы атакуют фосфодиэфирные связи последовательно, начиная с одного конца цепи нуклеиновой кислоты, в то время как эндонуклеазы атакуют также и связи внутри цепи. [21]
Не менее опасны и те молекулярные снаряды микробов, которые разрушают систему антимикробной обороны жертв. Так, один из токсинов возбудителей газовой гангрены подавляет защитную активность фагоцитов. А фермент этого возбудителя дезоксирибонуклеаза проникает в лейкоциты и, разрушая их генетический аппа-рат, парализует их фагоцитарную деятельность. Пагубно действует на лейкоциты и лейкоцидин, синтезируемый гноеродными стафилококками. А коагулаза, выделяемая этими же микробами, препятствует поглощению их лейкоцитами и вместе с тем повышает устойчивость к действию фагоцитов. [22]
 |
Огдменш ПОДЖЕЛУДОЧНОГО сока у собаки на мясо, хлеб и MOJOK ( но И. П. Павлову. [23] |
Сок поджелудочной железы богат а-амилазой, расщепляющей полисахариды до олиго -, ди - и моносахаридов. Дисахаридазная активность поджелудочного сока невелика. На нуклеиновые кислоты действуют рибо - и дезоксирибонуклеазы поджелудочного сока. Панкреатическая липаза расщепляет жиры до моноглицеридов и жирных кислот. На липиды действуют также фосфолипаза А и эстераза. [24]
Основными микробными ферментами, осуществляющими гидролиз высокомолекулярных соединений, являются гидролазы, расщепляющие белки, различные полисахариды, нуклеиновые кислоты, некоторые липиды. Из ферментов, расщепляющих белки и продукты их распада, можно назвать различные типы протеи-наз, пептидаз, интересные по своим свойствам субтилизин, кол-лагеназу и многие другие. Гидролиз полисахаридов производят: целлюлаза, представляющая собой систему последовательно действующих ферментов ( Сь Сд-целлюлазы и целлюбиаза); а -, 3-и иногда у-амилазы, различными путями гидролизующие крахмалы; хитиназа, расщепляющая хитин и включающая по крайней мере два фермента, первый - образующий из полимера дисаха-рид хитобиозу и второй - гидролизующий ее до стадии М - ацетил-глюкозамина; гиалуронидаза, расщепляющая мукополисахариды и др. На нуклеиновые кислоты действуют дезоксирибонуклеазы и рибонуклеазы бактерий, в частности стрептококков. Количество известных ферментов микробов, способных гидролизовать и вообще разрушать высокомолекулярные вещества разных типов, очень велико и быстро возрастает. [25]
В качестве примера комплексного использования ферментного сырья можно привести следующий. Как известно, из поджелудочной железы выделяют ценнейший гормональный белок-инсулин, без которого не могут жить больные диабетом. Остатки ткани железы ( после экстракции инсулина) обычно выбрасывали, несмотря на то, что в них содержался целый ряд ферментов. В последнее время в некоторых странах ( США, Дания, ФРГ) выданы патенты на способы получения из указанных остатков рибонуклеазы, протеолитических ферментов - химотрипсина и трипсина, а затем и дезоксирибонуклеазы. Имеются также данные, показывающие, что из этих же остатков можно легко получать эластазу, карбоксипептидазу и панкрин. [26]
Межнуклеотидные связи в ДНК и РНК можно химически расщепить с помощью гидролиза. Их можно гидролизовать и ферментами, которые называются ну-клеазами. Некоторые нуклеазы способны расщеплять связи между двумя соседними нуклеотидами, расположенными внутри цепи ДНК или РНК; такие нуклеазы называют эндонуклеазами. Нуклеазы другого класса могут катализировать гидролиз только связи концевого нуклеоти-да-или у 5 - или у 3 -конца молекулы; эти ферменты относятся к экзонуклеазам. Дезоксирибонуклеазы, специфически расщепляющие определенные межнуклео-тидные связи в ДНК, и рибонуклеазы - ферменты, специфичные к РНК, найдены во всех живых клетках. Они секретируют-ся, в частности, поджелудочной железой в кишечный тракт, где принимают участие в гидролизе нуклеиновых кислот в процессе пищеварения. Ниже мы увидим, что различные типы эндонуклеаз представляют собой важный биохимический инструмент для контролируемого расщепления ДНК и РНК на меньшие фрагменты при определении их нуклео-тидной последовательности. [28]
Следует отметить, что при пероральном применении протеиназ в ряде случаев общая протеолитическая активность крови заметно повышалась. Эффект более выражен при введении фермента не в водном, а в масляном растворе. Аппликационное применение ферментов при лечении гнойных ран и трофических язв давно уже вошло в медицинскую практику. Чаще всего в этих случаях применяют протеолитические ферменты, такие, как трипсин, химот-рипсин и др. Фермент гиалуронидазу из семенников крупного рогатого скота используют для рассасывания рубцов и лечения суставов. Для лечения гнойных легочных заболеваний применяют ингаляционные формы химотрипсина или трипсина; дезоксирибонуклеазу - для лечения вирусных заболеваний глаз. Однако парантеральное применение ферментов по указанным выше причинам в определенной степени затруднено. Тем не менее и в этом случае некоторые ферменты с успехом используются для лечения ряда заболеваний. Достаточно эффективно применение стрептодеказы - фермента, гидроли-зующего тромбы в кровеносных сосудах. При многих заболеваниях сосудов, таких, как артериальный тромбоз и глубокий тромбофлебит, с успехом применяют протеолитические ферменты различного происхождения. [29]
В опытах с кормлением различных лабораторных животных ( белые крысы, морские свинки, кролики, собаки) пищей с примесью NaF, криолита ( Ларжан и др.; Гудьонсон; Рохольм) или CaFz ( Лау-ренц и др.) наблюдались потеря аппетита, исхудание, у молодых животных - задержка роста, необычайная ломкость, костей, иногда утолщение костей черепа, нижней челюсти и скуловой кости. Изменения в костях обусловлены комбинацией остеопороза и остеосклероза, нарушениями обызвествления ( ср. Связь между отложением фтора и количеством Са и Р в костях неясна - данные очень противоречивы. Зубы становятся тусклыми, иногда коричневато - или серовато-окрашенными, эмаль трескается. Возможны изменения сахарной кривой при введении адреналина или инсулина, гипохромная анемия, ретикулоцитоз и лейкопения, понижение активности холинэстеразы и дезоксирибонуклеазы в сыворотке, повышение уровня щелочной фосфатазы. [30]
Страницы: 1 2 3