Диэтиламиноэтилцеллюлоза
Cтраница 2
При разделении белков ионообменной хроматографией [52] применяют прежде всего ионообменные смолы на полисахаридной основе, например аниониты DEAE-целлюлозу ( диэтиламиноэтилцеллюлозу) или DEAE-сефадекс и катиониты КМ-цел-люлозу ( карбоксиметилцеллюлозу) или КМ-сефадекс, в которых функциональные ионообменные группы связаны с гидроксильными группами моиосахаридных остатков. Гидрофильная основа иоиообменников не приводит х денатурации белков. При концентрационном градиенте ионизованные белки разделяются в результате взаимодействия с ионами соли, в случае градиента рН разделение вызвано изменением электрических зарядов белков. Ионообменная хроматография предложена в 1956 г. Петерсоном и Соберем. На рис. 3 - 7 приведена диаграмма элю-ирования смеси различных гемоглобинов. [16]
Фильтрованные пробы подвергались фракционированию по схеме, приведенной на рис. 2.1. Исследуемая проба воды пропускалась последовательно через колонки с диэтиламиноэтилцеллюлозой ( ДЕАЕ) в ОН-форме и карбоксиметил-целлюлозой ( СМ) в Н - форме. [17]
Отдельные представители этой группы ионитов и области применения следующие: карбоксиметилцеллюлоза ( КМ-целлюлоза) - для разделения белков и ферментов; диэтиламиноэтилцеллюлоза ( ДЭАЭ-целлюлоза) - для разделения и очистки белков, Сахаров, нуклеотидов, ферментов, витаминов, липидов, гормонов; ЭКТЕО-ЛА-целлюлоза - для фракционирования нуклеотидов, аминокислот, белков; фосфатцеллюлоза ( Ф - целлюлоза) - для хроматографического разделения протеинов сыворотки. [18]
Так, в одном случае гаммаглобулин прочно сорбировался на сульфометилцеллюлозе, а затем взаимодействовал с антителом; в другом случае антиген ( R-фикоэретрин) сорбировался диэтиламиноэтилцеллюлозой и в дальнейшем взаимодействовал с антисывороткой. Обзор выполненных ранее исследований по иммуноадсорбентам можно найти в работе [58] ( см. также разд. [19]
Диэтиламиноэтилцеллюлоза представляет собой слабощелочной анионит, поэтому Сорбируемость белков на ней наибольшая в слабощелочной среде. [20]
Простые эфиры целлюлозы - метилцеллюлоза R СН3 и натрий-карбоксиметилцеллюлоза R CH COONa - образуют вязкие водные растворы или гели и применяются в фармации в качестве загустителей, эмульгаторов и стабилизаторов мазей и эмульсий. Карбоксиметилцеллюлоза R CH COOH и диэтиламиноэтилцеллюлоза ( сокращенно ДЭАЭ-целлюлоза) R CH CH N ( C H5), обладают способностью связывать ионы и используются в биохимических исследованиях как иониты. [21]
Для хроматографического отделения хрома от других элементов применяют различные сорта бумаги: Ватман № 1 [615, 730, 733, 746, 921, 982, 984, 985, 1048, 1086], Ватман № 2 [879-882], Ватман № 3 [290, 312, 1019] и Ватман № 4 [641], Шлейхер и Шюль № 2040 [641] и № 2043 [615, 746, 1087], Нидершлаг WF-14 [487], бумага марки FN-3 [230], бумага, выпускаемая Ленинградской фабрикой им. Кроме того, используют бумагу на основе диэтиламиноэтилцеллюлозы [1043], бумагу, импрегни-рованную фосфатами циркония [744, 1020] и олова [166], арсена-тами оло. [22]
 |
Распределительная хроматография т. РНК дрожжей на кремневой кислоте. [23] |
В качестве адсорбентов обычно используют слабые аниониты - диэтиламиноэтилцеллюлозу или ДЭАЭ-сефадекс. Транспортные РНК при хроматографии на ДЭАЭ - и ЭКТЭОЛА-целлюлозах двигаются компактной зоной, и лишь тщательный анализ показывает, что имеет место частичное разделение. [24]
СООН или диэтил-аминоэтильных групп - C2H4N ( C2H5) 2; в результате получают карбоксиметилцеллюлозу ( КМ-целлюлозу, или КМЦ) и диэтиламиноэтилцеллюлозу ( ДЭАЭ-целлюлозу), соответственно. Эти производные широко применяют в хроматографии для разделения аминокислот, белков, нуклеиновых кислот в качестве катионо - и анионообменных носителей. При полном гидролизе целлюлозы в присутствии концентрированных кислот образуется D-глкжоза; такой гидролизат используется для получения технического этилового спирта, для выращивания кормовых дрожжей и приготовления некоторых медицинских препаратов. Неполный гидролиз целлюлозы приводит к цел-лобиозе. [25]
СООН или диэтил-аминоэтильных групп - C2H4N ( C2H5) 2; в результате получают карбоксиметилцеллюлозу ( КМ-целлюлозу, или КМЦ) и диэтиламиноэтилцеллюлозу ( ДЭАЭ-целлюлозу), соответственно. Эти производные широко применяют в хроматографии для разделения аминокислот, белков, нуклеиновых кислот в качестве катионо - и анионообменных носителей. При полном гидролизе целлюлозы в присутствии концентрированных кислот образуется D-глюкоза; такой гидролизат используется для получения технического этилового спирта, для выращивания кормовых дрожжей и приготовления некоторых медицинских препаратов. Неполный гидролиз целлюлозы приводит к цел-лобиозе. [26]
Образец обрабатывают меркаптоуксусной кислотой, причем Н и - SHCH2COOH присоединяются к двойным связям и ненасыщенные жиры превращаются в кислоты. Встряхивают с этиловым спиртом, петролейным эфиром, водой и аммиаком и отбрасывают водную фазу, в которой содержатся избыток меркаптоуксусной кислоты и немного ее глицеридов. Органическую фазу вводят в колонку с диэтиламиноэтилцеллюлозой для отделения остатка глицеридов меркаптоуксусной кислоты. Вытекший с колонки раствор выпаривают и взвешивают сухой остаток ненасыщенных жиров. К сожалению, в остатке содержится также небольшое количество двузамещенного моноолеинового глицерида, который не реагирует с меркаптоуксусной кислотой. [27]
Успешное применение в хроматографии на бумаге целлюлозы с ионогенными заместителями ( разд. Из-за крупнопористой структуры целлюлозы даже очень большие ионы, как, например, белка, быстро диффундируют внутрь целлюлозных ионообменников, а поэтому и обмен происходит быстро. Наоборот, ионы такого же размера не могут проникнуть в обыкновенные смолы или неорганические ионообменники. Собер и Петерсон описывают разделе-ление 270 мг диализованных, лиофилизованных белков почки на колонке с 5 г диэтиламиноэтилцеллюлозы при вымывании 0 005 М раствором фосфата с рН 7 0, который постепенно понижался вследствие замены этого раствора на 0 1 М Na2HPO4 в 0 5 М хлориде натрия. На выходной кривой хорошо различаются три пика. [28]
Страницы: 1 2