Cтраница 2
Для калибровки колонок необходимо наличие серии соединений с известной молекулярной массой или достаточно хорошо охарактеризованных узких фракций полимеров, которые, кроме того, должны иметь структурное сходство с исследуемыми веществами, что иногда создает дополнительные трудности при анализе углеводов. В отсутствие подходящих стандартов для калибровки колонок при анализе мо-лекулярно-массового распределения других полисахаридов часто применяют декстраны фирмы Pharmacia. Однако следует подчеркнуть, что при анализе полисахаридов, структурно отличающихся от декстранов, на результаты калибровки можно опираться при условии, что соотношение между молекулярной массой и молекулярным размером исследуемого полимера имеет тот же порядок, что и для декстрана. Универсальная калибровка, в основе которой лежит определение зависимости между Ve и IgM-JT ] ] ( где [ TJ ] - истинная вязкость, которая служит мерой гидродинамического объема молекулы в растворе) [127], может быть использована только в случае достаточно длинной полимерной цепи. Несмотря на непрекращающиеся попытки [ 129, 1301 найти некую общую зависимость, справедливую для всех полисахаридов, калибровку колонок по охарактеризованным фракциям исследуемого полисахарида, видимо, не удастся заменить. Выделение узких фракций для определения их характеристик ( такими методами, как ультрацентрифугирование, светорассеяние и др.) требует применения препаративной СЭХ, которую раньше считали медленным процессом. Однако появление в последнее время сорбентов, которые могут быть использованы в условиях высокоскоростной жидкостной хроматографии, должно в значительной степени сократить время подобного рода препаративного фракционирования. [16]
Для этого применяют метод итерации. Вначале полагают, что хроматограмма полимера скорректирована на приборное уширение и полимер линеен. Определив для него wk и Mk для каждой узкой фракции полимера, используя Кп и а из литературных данных и измерив характеристическую вязкость исследованного образца, получают из формулы (VI.52) значения а. Далее, подставляя полученное значение а в уравнение (VI.53), находят с использованием универсальной калибровки уточненные значения Mk. Эти новые значения Mk, соответствующие постоянным wk, подставляют в формулу (VI.52) и получают уже более точные значения ос. Многократно подставляя а, полученное из формулы (VI.52) в (VI.53) и определенное таким образом Mk снова в (VI.52), продолжают счет до тех пор, пока разность новых значений а и Mk с предыдущим окажется меньше определенной наперед заданной величины. [17]