Cтраница 2
При макроскопическом электрофорезе методом подвижной границы разделяющую среду стабилизируют, повышая ее вязкость с помощью сахарозы, желатины или крахмала. Часто в конструкцию электрофоретических камер вводят охладительные змеевики и водяные рубашки. При микроэлектрофорезе методом массопереноса и препаративных разновидностях свободного электрофореза наряду с платиной - универсальным электродным материалом для изготовления анодов - используют цинк, свинец, серебро, молибден, титан, покрытый двуокисью марганца, для изготовления катодов - цинк, титан, железо, никель. Конструктивно разнообразные электрофо-ретические ячейки отличаются прецизионным исполнением в основном лишь в тех случаях, когда они входят в качестве составного узла в измерительный преобразователь более сложного типа, использующий двойной эффект: электрохимический и оптический. [16]
Во всех этих приборах реализован так называемый микроскопический метод измерения. Наблюдения за движением частиц в электрофоретической камере ведутся с помощью микроскопа с непосредственным измерением скорости ( времени и пути) перемещения частиц в этой камере. [17]
Два ее конца погружают в буферные отсеки электрофоретической камеры, а через третий отвод насасывают буферный раствор. Когда раствор заполнит трубку, этот отвод перекрывают зажимом. [18]
Подобно хроматографии на бумаге, при тонкослойной хромато. В одном направлении, как правило проводят электрофорез в электрофоретической камере с малым объемом для испарения; контакт между слоем адсорбента и электродными отсеками в этих камерах обеспечивают фитили из фильтровальной бумаги. Из-за низкой теплопроводности стекла и связанным с этим слабым тепловым рассеянием может возникать проблема охлаждения хроматографической пластинки. Для снижения образования тепла рекомендуется работать на стеклянных пластинках минимальной толщины и применять буферные растворы по возможности минимальной ионной силы. [19]
Фракции продолжают диффундировать после выключения тока. Чтобы избежать этого, следует сразу же после выключения тока извлекать электрофореграммы из электрофоретической камеры. [20]
Нежелательные эффекты и интенсивность этих противоположно направленных потоков в принципе минимальны, так как в герметизированном приборе для электрофореза быстро создаются условия влажной камеры. Кроме того, конструкция некоторых аппаратов для электрофореза предусматривает впускной штуцер для введения пара в электрофоретическую камеру, что позволяет начать электрофорез в насыщенной паром атмосфере. [21]
Подготавливают к работе прибор для электрофореза на бумаге. Может быть использован прибор для вертикального электрофореза ПВЭФ-1. Электрофоретическая камера ПВЭФ-1 представляет собой ванну с перегородкой в середине и стойкой для крепления бумажных полос. Камеру заполняют соответствующим раствором электролита. [22]
В процессе разделения нейтральные незаряженные соединения остаются на старте; компоненты основного характера передвигаются от стартовой линии по направлению к катоду, соединения кислотного характера - к аноду. На стандартном листе ватмана можно одновременно анализировать до 20 проб, если габариты электрофоретической камеры соответствуют размеру листа. При напряжении 1500 В длительность анализа составляет 60 - 90 мин. [23]
Хорошая охлаждающая жидкость не должна смешиваться с водой, должна иметь высокую теплоемкость и высокую температуру вспышки. Высыхание бумаги во время электрофореза вызывает увеличение электрического сопротивления в цепи, что в свою очередь может привести к искровому разряду. Если охлаждающая жидкость имеет низкую температуру вспышки, создается опасность пожара, так как электрофоретическая камера наполнена 50 - 80 л легковоспламеняющейся жидкости. Обычно используют в качестве охлаждающей жидкости толуол, который имеет вполне подходящую теплопроводность, но слишком низкую температуру вспышки и поэтому легко воспламеняется. В отличие от толуола фракция нефти, известная под коммерческим названием уайт-спирит, имеет довольно высокую температуру вспышки. Кроме нее, можно использовать также четыреххлористый углерод, который не воспламеняется, но плохо проводит тепло. [24]
Когда закончится разделение фракций, электрический ток выключают и осторожно поднимают стеклянную крышку аппарата. Нужно следить, чтобы скопившийся на внутренней поверхности крышки конденсат не попал на полоски бумаги. Рамку с полосками извлекают из электрофоретической камеры и помещают в проволочную корзинку так, чтобы концы полосок, ранее лежавшие у края рамки, теперь располагались бы на краях корзинки. [25]
Увлажнение DEAE - бумаги на рамке раствором 7 % - ной муравьиной кислоты проводят следующим образом: большую часть бумаги, за исключением той части, где. Участок, куда перенесено вещество, смачивают гораздо более осторожным обрызгиванием только до увлажнения бумаги. Затем рамку осторожно помещают в электрофоретическую камеру и включают ток. [26]
Электрофорез на ацетат-целлюлозных мембранах описан на стр. Наносить следует по возможности одним движением на расстоянии 0 1 - 1 0 см от места нанесения исследуемого образца параллельно направлению его разделения при электрофорезе. После того как нанесенная иммунная сыворотка впитается, мембрану извлекают из электрофоретической камеры и погружают в вазелиновое масло. [27]
Полоску насыщают буферным раствором с рН 3 5, содержащим 0 5 % пиридина и 5 % уксусной кислоты. Электрофорез продолжается в течение 2 ч при напряжении в 3000 В. Нуклеотиды всегда движутся между медленным синим и быстрым розовым индикаторами. Все еще влажную полоску ацетата целлюлозы помещают на лист DEAE-бумаги размером 470X560 мм на расстоянии около 100 мм от одной из ее меньших сторон. На полоску ацетата целлюлозы помещаются 4 слоя смоченных водой полосок размером 460 X Х20 мм из бумаги ватман № 3 ММ и затем прижимают их стеклянной пластиной так, чтобы нагрузка равномерно распределялась по всем слоям. Вода, проходящая через ацетатную пленку, элюирует нуклеотиды, которые затем связываются ионообменной бумагой. DEAE-бумагу высушивают теплым воздухом, затем увлажняют 7 % - ной муравьиной кислотой и помещают в электрофоретическую камеру. [28]