Cтраница 1
Количество связанного глицина указывает на сравнительно небольшие различия в числе реакционноспособных групп для разных носителей этого типа. В табл. 8.1 приведена также относительная протеолитиче-ская активность. [1]
Определить количество глицина непосредственно в гидро-лизатах не удается, так как в этой системе он движется вместе с аргинином и гистидином. [2]
Предположим, что требуется определить - количество глицина, находящегося в смеси с другими аминокислотами. Глицин можно изолировать химическим путем, но лишь с малым выходом; следовательно, в данном случае пригоден метод изотопного разбавления. [3]
Глицин с радиоактивным 14С по химическим свойствам не отли -, чается от обычного глицина, поэтому при выделении некоторого количества глицина из анализируемого раствора относительное содержание радиоактивного компонента не изменяется. [4]
Если, например, 0 500 г синтезированного глицина с активностью 25 000 импульсов в минуту на 1 г смешаны с гидролизатом и если изолированный из смеси глицин показывает активность 2000 импульсов в минуту на 1 г, то количество глицина ( х) в гидролизате можно рассчитать следующим образом. [5]
Так как активность глицина с меченым 14С составляет 19000 имп / мин на 1 00 г, то 0 100 г этого препарата имеет активность 0 1 - 190001900 имп / мин. Такую же активность должно иметь и все количество глицина ( 0 100 л) г, находящееся в растворе, если х - количество глицина в смеси аминокислот до прибавления радиоактивного изотопа. [6]
Чибнэлл и Рис в одной из предварительных работ [276] сообщили, что в инсулине нет остатков аспарагиновой кислоты и содержится 8 остатков глутаминовой кислоты, 6 остатков глутамина и 6 остатков аспарагина, причем два из последних являются С-концевыми. Кроме того, обнаружены 2 концевые аланиновые группы и некоторое количество глицина. Последний образуется, вероятно, вследствие миграции аминоацильных остатков. [7]
Так как активность глицина с меченым 14С составляет 19000 имп / мин на 1 00 г, то 0 100 г этого препарата имеет активность 0 1 - 190001900 имп / мин. Такую же активность должно иметь и все количество глицина ( 0 100 л) г, находящееся в растворе, если х - количество глицина в смеси аминокислот до прибавления радиоактивного изотопа. [8]
При гидролизе протеинов получается смесь большого числа аминокислот и среди них глицина, лизина, тирозина, аспарагиновой и глутаминовой кислот. Каждое из этих веществ можно изолировать посредством обычных химических операций, но при этом происходят значительные потери, так что становится затруднительно оценить точно количество каждого компонента. Допустим, что необходимо определить количество глицина в гидролизате. Навеску этого активного препарата тщательно смешивают с неочищенным гидролизатом. Затем любым способом выделяют из смеси небольшую порцию чистого глицина. Эта порция содержит часть активного вещества, разбавленного неактивным глицином, образовавшимся из протеинов. Интенсивность его радиоактивности служит мерой разбавления, что является основой для расчета общего количества глицина в протеине. [9]
При гидролизе протеинов получается смесь большого числа аминокислот и среди них глицина, лизина, тирозина, аспарагиновой и глутаминовой кислот. Каждое из этих веществ можно изолировать посредством обычных химических операций, но при этом происходят значительные потери, так что становится затруднительно оценить точно количество каждого компонента. Допустим, что необходимо определить количество глицина в гидролизате. Навеску этого активного препарата тщательно смешивают с неочищенным гидролизатом. Затем любым способом выделяют из смеси небольшую порцию чистого глицина. Эта порция содержит часть активного вещества, разбавленного неактивным глицином, образовавшимся из протеинов. Интенсивность его радиоактивности служит мерой разбавления, что является основой для расчета общего количества глицина в протеине. [10]
Для определения аминокислот в гидролизатах успешно применяется и метод разбавления изотопной метки. Затем глицин выделяют и сравнивают его радиоактивность с радиоактивностью добавленного препарата. По степени разбавления изотопной метки рассчитывают количество глицина в гидролизате. Метод не требует полного выделения аминокислоты; в этом его достоинство. [11]
Реакционную смесь, охлаждаемую во льду, перемешивают 1 ч, затем фильтруют для удаления осадка хлорида триэтилам-мония. Раствор добавляют к 50 мг карбоксильного производного геля. Гель отделяют центрифугированием, ресус-пендируют в 5 мл диметилсульфоксида и снова центрифугируют. Промывание диметилсульфоксидом повторяют три раза, а затем трижды промывают ацетоном. После высушивания в течение 24 ч над пятиокисью фосфора в вакууме проводят кислотный гидролиз 6 М соляной кислотой в течение 48 ч при 110 С; количество глицина в геле определяют на аминокислотном анализаторе. [12]
Для успешного применения метода аффинной хроматографии необходимо иметь представления о свойствах как нерастворимых носителей, так и иммобилизованных аффинных лигандов. Одними из основных свойств, определяющих возможность использования нерастворимых носителей для целей аффинной хроматографии, являются сорбционные. Для связывания аффинного лиганда важно количество активируемых или активных групп, способных присоединить молекулы аффинного лиганда. Число групп, которые могут быть использованы для иммобилизации, часто оценивается на основе данных о присоединении низкомолекулярных веществ, например глицина или гли-циллейцина, к эпоксиактивированным гелям. Некоторые методы определения содержания этих веществ описаны в разд. Из табл. 8.1, в которой приведены количества глицина и химотрипси-на, присоединенных к различным типам сферона, видно, как важно принимать во внимание размер иммобилизуемых молекул и площадь поверхности нерастворимого носителя. [13]