Cтраница 4
Гидроксильные группы, расположенные в остатках моноз в цис-положении, легко образуют комплексы со щелочными растворами солей меди и боратами. Образование комплексов гидроксильных групп в положении Сг и Сз остатков моносахаридов глюкоманна-нов с боратами делает полисахариды более кислыми и более растворимыми в щелочах. По Фостеру [19], боратные комплексы представляют собой производные от соединения R ( OH) 2, имеющие соответствующие ориентированные группы. [46]
Элюирование проводят щелочными растворами возрастающей концентрации. В этом случае колонку предварительно переводят в борат-ную форму; полисахариды, образующие боратные комплексы, задерживаются на колонке и их можно элюировать раствором бората с возрастающей концентрацией. Полисахариды, не образующие боратных комплексов, проходят через колонку. [47]
Электрофорезе различных модификациях применяется в химии полисахаридов, хотя и в меньшей степени, чем хроматография. Нейтральные полисахариды разделяют в боратном буфере. Маннаны, обладающие соседними цыс-гидроксилами, легче образуют боратные комплексы, чем глюканы; эти комплексы обладают большей прочностью и подвижностью. [48]
Разделение и анализ Сахаров методически аналогичны разделению и анализу аминокислот и могут проводиться на идентичном оборудовании. Таким образом, для разделения Сахаров можно применять любой автоматический анализатор аминокислот, если подобрать соот ветствующие смолу, элюент, окрашивающий реагент и температуру колонки. Например, в анализаторе Сахаров фирмы Technicon используется метод боратных комплексов; после разделения элюированные сахара определяются на Автоанализаторе колориметрически по реакции с орсином. Схема анализатора Technicon приведена на рис. 9.9. Термостатируемая ( 45 С) колонка заполняется сильноосновной анио-нообменной смолой ( марки Cromatobeads Technicon типа S) со сферическими гранулами почти одинакового диаметра. Использование однородных гранул позволяет получить максимальное разрешение колонки и свести к минимуму ее сопротивление. Полученный элюент подается на верх ионообменной колонки с помощью микронасоса. Основная масса элюата направляется в коллектор фракций, а небольшая часть подается непосредственно на непрерывный анализ. В анализаторе используются внутренние стандарты. Концентрацию отдельных Сахаров можно рассчитать по площадям пиков диаграммы самописца либо вручную, либо с помощью цифрового интегратора, поставляемого отдельно. [49]
Элюирование проводят щелочными растворами возрастающей концентрации. В этом случае колонку предварительно переводят в боратную форму; полисахариды, образующие боратные комплексы, задерживаются на колонке, откуда их можно вымывать раствором бората возрастающей концентрации. Полисахариды, не образующие боратные комплексы, проходят через колонку. [50]
Гель-фильтрация, для которой используют сшитые декстраны или полиакриламидные гели, основана на разделении углеводов по размеру их молекул; ее применяют для предварительного разделения полисахаридов до начала определения их строения. Ионообменную хроматографию применяют для разделения углеводов с ионизируемыми группами. Однако в боратном буфере можно разделить и нейтральные сахара; в этих условиях они превращаются в боратные комплексы [39], которые затем фракционируют на ионообменной смоле в бо-ратной форме. Эти виды колоночной хроматографии часто используют совместно для определения степени чистоты и микрогетерогенности углеводсодержащего образца. [51]
При высоких значениях рН гидроксильная группа может быть ионизирована в виде несущего заряд полианиона. В боратных буферных растворах полисахариды образуют отрицательно заряженный комплекс, который, как правило, должен двигаться к аноду. Однако при электрофорезе на твердых носителях ( бумага, волокно, стеклянный порошок) при рН 9 3 возможно перемещение боратных комплексов к катоду. [52]
Определение моносахаридного состава проводится анализом продуктов кислотного гидролиза или. Состав продуктов кислотного гидролизата анализируется с помощью хроматографии или электрофореза на бумаге. Нередко используется коммерческий углеводный анализатор, разделение осуществляется на ионообменных смолах методом распределительной хроматографии в водно-спиртовой смеси или в виде боратных комплексов Сахаров. Скорость гидролиза гликозидных связей, образованных остатками нейтральных, амино - и дезокси-сахаров, различна. Легче всего отщепляются остатки сиаловых ( N-ацетилнейраминовой, N-гликолилнейраминовой) кислот, труднее всего расщепляются связи, образованные остатками а ми носа ха ров и уроновых кислот. Фуранозиды гидролизуются значительно быстрее пиранозидов. В итоге при гидролизе олигосахарида может иметь место неполное расщепление связей или кислотная деструкция образующихся моносахаридов, что искажает результаты анализа. НО, 80 С, 18 ч) - в этом случае образуются метилгликозиды, устойчивые к кислотной деструкции. Качественный и количественный состав продуктов метанолиза определяется методом газожидкостной хроматографии в виде триметилсилильных или трифторацетильных производных. [53]