Корнберг

Cтраница 1

Корнберг, используя в качестве матрицы природную ДНК, осуществил синтез биологически активной ДНК. [1]

Дезоксирибонуклеозид-5 - трифосфат, меченный [ 32Р ] в а-положении. [2]

Корнберг и его коллеги, изучая вопрос о том, зачем ДНК-полимеразе необходимо присутствие ДНК, нашли, что эта ДНК выполняет в полимеразной реакции две важнейшие функции-она служит затравкой и матрицей. [3]

Корнберг и его сотрудники [51, 149] предположили, что механизм, обусловливающий затравочную активность такого олиго-нуклеотида, как д ( А - Т), носит следующий характер ( фиг. На первом этапе происходит репликация матрицы, причем образование новой цепи начинается с З - гидроксильного конца матрицы. Затем вновь образованная спираль плавится и вновь отжигается таким образом, что в результате освобождается участок матрицы, делая возможным дальнейшую репликацию. В результате такого соскальзывания новая цепь сдвигается вдоль матрицы сразу на целое звено AT, что обеспечивает условия для правильного образования пар оснований. Процесс этот строго зависит от температуры: в то время как д ( А - Т) 4 лучше всего работает как затравка при 10, д ( А - Т) гораздо продуктивнее при 37, поскольку он связан со своей репликой множеством водородных связей, что затрудняет скольжение. [4]

Корнберг: В ходе катаболических процессов из пищевых источников углерода образуются взаимопревращаемые промежуточные продукты центральных путей обмена; анаболические же пути представляют собой последовательности ферментативных реакций, в процессе которых из этих промежуточных продуктов образуются строительные блоки, входящие в состав макромолекул. [5]

Корнбергом), помимо полимера зной активности, обладает еще двумя типами экзонуклеазнои активности: как 5 - - З - экэонуклеаза она осуществляет с 5 -конца двухцепочечных ДНК деградацию, в результате которой происходит отщепление 5 -моно - и 5 -фосфорилирован-ных коротких олнгонуклеотидов, а как 3 - 5 -экзонуклеаза последовательно отщепляет 5 -мононуклеотиды с З - концов двухцепочечных и одноцепочечных ДНК. [6]

Макромолекулярные характеристики. [7]

Реакция Корнберга протекает при рН 7.5 в присутствии 6 10 - 3М магния. Равновесие в этой реакции сильно смещено в сторону синтеза, ибо даже очень низкая концентрация мономеров ( 10 - 5М) приводит к практически полному израсходованию мономера. Это видно, если применять пирофосфат меченый Р32, Постепенно нуклеозидтрифосфаты также метятся, и скорость этой реакции становится близкой к скорости синтетической реакции Корнберга. [8]

Фермент Корнберга вовлекает бромуридинтрифосфат в полимеризацию с аденозинтрифосфато 1, и в результате получаются смешанные цепочки. Убедиться в этом нетрудно, применяя метод ультрацентрифугирования в градиенте плотности. Это различие в плотностях столь велико, что применение метода Месель-сона здесь весьма просто. Эксперимент отлично подтвердил написанное выше уравнение и тем самым показал, что синтез ДНК в реакции Корнберга идет также путем редупликации и разделения двойных спиралей, как это с несомненностью было показано для биосинтеза ДНК в клетке. [9]

Синтез Корнберга на затравке или, как предпочитают говорить, на матрице находит простое объяснение с точки зрения этой модели. [10]

Синтез Корнберга на затравке или, как предпочитают говорить, на матрице находит простое объяснение с точки зрения этой модели. Обозначим буквами участки макромолекулы с аденином через А, с гуанином через G, с тимином через Тис цитозином через С, а водородные связи - пунктиром из трех точек. [11]

В лаборатории Корнберга получены данные о близком сходстве между затравкой и вновь образованной ДНК. Четыре нуклеотида ДНК могут быть соединены 5 - - 3 -связью, образуя только 16 различных динуклеотидов. Эти динуклеотиды названы ближайшими соседними парами оснований. Можно определить частоту, с которой эти различные динуклеотиды встречаются в ДНК, синтезированной при использовании бесклеточных экстрактов. ДНК-поли-мераза катализирует этерификацию фосфата, присоединенного к С-5 - атому дезоксирибозы, входящей в состав нуклеозидтрифос-фатов. Этот фосфат соединяется эфирной связью с С-3 - атомом дезоксирибозы другого нуклеотида. Если подействовать ДНК-полимеразой на ТТФ, дАТФ, дЦТФ и дГТФ32 и гидролизовать полученную ДНК до образования нуклеотид - З - фосфатов, то меченый фосфор перейдет от дГТФ32 ко всем тем нуклеотидам, с которыми дГТФ32 был соединен 5 - З - связью. Измеряя содержание радиоактивного фосфора в каждом из четырех нуклеозид-3 - фосфатов, можно определить частоту повторяемости различных ближайших к гуанину соседних пар оснований. Подобные данные получены и для других оснований. [12]

В работе Корнберга [39] были получены мутанты Enterobacteriaceae ( S. На основании этого факта было сделано предположение об отсутствии у мутантов фермента, выполняющего анаплеротическую функцию. В самом деле, мутанты отличались от дикого типа отсутствием у них фосфопируваткарбоксилазы ( фермент 2 на фиг. [13]

Еще Кребс и Корнберг отмечали, что, несмотря на огромное разнообразие пищевых веществ ( белки, жиры, углеводы), число химических реакций, обеспечивающих их превращения ( распад) и образование энергии, удивительно мало. [14]

Синтез ДНК ( Корнберг) происходит при наличии в системе: ДНК - полимеразы, всех четырех дезоксирибонуклеозидтрифосфатов ( АТФ, ГТФ, ЦТФ и ТТФ) и минимального количества ДНК-затранки. При этом освобождается пирофосфат. Синтезируемая ДНК точно соответствует ДНК затравке. ДНК затравка функционирует как матрица для своей собственной репликации путем разделения двух нитей и образования вокруг каждой из них новой нити с комплементарным ( стр. [15]

Страницы: 1 2 3 4