Cтраница 2
Полимерный носитель в методе Меррифидда - это гранулированный сшитый полистирол ( Р), содержащий хлорметильные группы в бензольных ядрах. Эти группы превращают полимер в функциональный аналог бензилхлорида и сообщают ему способность легко образовывать сложноэфирные связи при реакции с карбоксилат-анионами. Аминоацилирование освобожденной аминогруппы N-защищенным производным второй аминокислоты с последующим удалением N-защиты приводит к аналогичному производному дипептида 38, также привязанному к полимеру. [16]
Эффективное аминоацилирование нуклеозидов и нуклеотидов может быть осуществлено при действии имидазолидов N-замещенных аминокислот 5859; при использовании грет-бутил-оксикарбонильной и формильной защитных групп реакция может быть проведена в водном растворе. В этих условиях аминогруппа цитидина не затрагивается. С помощью данного метода удалось осуществить аминоацилирование суммарной тРНК из дрожжей60 м, причем 60 - 65 % остатков аминокислоты оказалось соединено с концевой цыс-гликольной группировкой полимера. [17]
Полимерный носитель в методе Меррифилда - это гранулированный сшитый полистирол ( Р), содержащий хлорметильные группы в бензольных ядрах. Эти группы превращают полимер в функциональный аналог бензилхлорида и сообщают ему способность легко образовывать сложноэфирные связи при реакции с карбоксилат-анионами. Удаление N-зашиты из 36 дает С-защищенное производное первой аминокислоты, ковалентно связанное с полимером 37, Аминоацилирование освобожденной аминогруппы N-защищеннъш производным второй аминокислоты с последующим удалением N-зашиты приводит к аналогичному производному дипептида 38, также привязанному к полимеру. [18]
Как видно из приведенных в этой статье методик, анализ радиоактивных полимеров на фильтрах имеет разнообразное применение. Важной особенностью этих методик является одновременная обработка большого числа образцов. Чирейл и Бок [10] расширили возможности метода: они наносили на фильтры фракции тРНК и проводили их аминоацилирование прямо на фильтрах. Таким образом осуществляется прямой анализ каждой фракции РНК после разделения их на колонке. Метод одновременной отмывки большого числа проб применим и к ДЭАЭ-фильтрам; он был использован Мидом [11] для определения активности олигонуклеотидилтранс-феразы. [19]
Отличительной особенностью синтеза явилось то, что синтетическая тРНК содержала минорные иуклеотиды. Для синтеза 76-иуклеотид-ная последовательность тРНК была разбита на 6 олигоиуклеотид-ных сегментов величиной от 9 до 19 звеньев. Изучение биологической активности синтетической тРНК показало, что она обладает полной активностью природной дрожжевой аланиновой тРНК в реакциях аминоацилирования и образования пептидной связи на рибосоме. [20]