Cтраница 2
Этот антибиотик ( рис. 103) также действует только на бактериальные 70S рибосомы, но не на эукариотические 80S рибосомы. Линкомицин конкурирует с хлорамфениколом за связывание с рибосомой. По-видимому, он ингибирует взаимодействие акцепторного субстрата с пептидилтрансферазным центром по конкурентному механизму. [16]
Из этой группы антибиотиков наиболее известны линкомицин и клиндамицин, агликоном которых является метил. Из них клиндамицин является производным линкомицина, у которого гидроксил в позиции 7 заменен на хлор. [17]
Кодонзависимое связывание фактора терминации необходимо, чтобы произошли гидролиз пептидил-т РНК в Р - участке и освобождение полипептида из рибосомы. Показано, что гидролиз пептидил-т РНК в рибосоме подавляется всеми теми же ингибиторами, которые подавляют пептидилтрансферазную реакцию. Так, хлорамфени-кол, амицетин, линкомицин, гугеротин, спарсомицин и др., будучи типичными ингибиторами рибосомной пептидилтрансферазы, подавляют RF-индуцируемое освобождение пептида из бактериальных рибосом. Эти же антибиотики совсем не подавляют кодонзависимого связывания RF с бактериальной рибосомой. [18]
Для выявления вирусных бляшек под бентонитовым питательным покрытием применяют многослойные культуры перевиваемых клеток человека или животных, чувствительные к исследуемому вирусу; пригодны 1 - 2-суточные негустые монослои клеток. Готовят 10-кратные разведения из исследуемого материала, каждым разведением инфицируют не менее двух матрацев ( колб Эрленмейера или пенициллиновых флаконов) с культурой клеток. После адсорбции вируса ( 30 - 40 мин) монослои 3 - 4 раза отмывают стерильным ИХН и заливают бентонитовым питательным покрытием: бидистиллированная вода - 415 мл, 5 - 6 % - й гель бентонита - 5 мл, раствор Эрла ( десятикратный концентрат) - 50мл, нативная бычья сыворотка - 15 мл, 7 5 % - й раствор гидрокарбоната натрия - 15 мл, пенициллин - 200 ЕД / мл, стрептомицин или линкомицин - 100 ЕД / мл. Монослой зараженных клеток в колбах Эрленмейера емкостью 50 мл заливают 20 - 30 мл бентонитового покрытия, а монослой клеток на дне пенициллинового флакона - 5 - 6 мл. [19]
Поскольку антибиотики представляют собой довольно лабильные соединения, то при анализе применили низкотемпературный пиролиз при 375 С, при этом получены пиро-граммы, пригодные как для идентификации, так и для количественного анализа. Продукты пиролиза разделяли на колонке 3 м х 3 мм с 5 % FFAP на диапорте или на колонке с 2 % QF-1 в изотермическом режиме при 75 С или при программировании температуры от 50 до 200 С ( или 230 С) со скоростью 7 9 С / мин. Близкие по структуре антибиотики, которые не удавалось ранее идентифицировать традиционными методами бумажной, тонкослойной хроматографии и ИК-спектроскопии, были идентифицированы по пирограммам. Низкотемпературный пиролиз позволил идентифицировать алкилзамещенные производные линкомицина с различным расположением заместителей в молекуле. Некоторые продукты пиролиза идентифицированы с помощью масс-спектрометра, что позволило определить структуру заместителей. [20]