Cтраница 2
Значение фосфолипидов как субстратов, поставляющих энергию, не столь значительно; здесь главную роль играют нейтральные липиды, которые являются одним из наиболее важных энергетических источников организма. [16]
Для проявления высушенную хроматограмму после испарения растворителя опрыскивают с помощью пульверизатора раствором фосфорномолибденовой кислоты: через несколько минут нейтральные липиды обнаруживаются в виде белых пятен на голубом фоне. [17]
Витиелло и Дзанетта [97] создали систему одномерной высокоэффективной ТСХ ( ВЭТСХ), которая позволяет полностью разделить основные галактолипиды, нейтральные липиды и фос-фолипиды, встречающиеся в мозге. [18]
Состав липидов бактерий представлен прежде всегб сложными липидами - фосфо - и гликолипидами. Нейтральные липиды составляют очень небольшую часть общего количества липидов. Фосфатидилинозиты являются основными фосфатидными компонентами сложных гликолипидов микобактерий и коринебакте-рий. Биологические функции их неизвестны. Фосфати-дилхолины ( лецитины) у большинства видов бактерий не обнаружены. Фосфатидилэтаноламины ( кефалины) являются основными фосфатидными компонентами грамотрицательных бактерий, выполняют структурную функцию. Фосфатидилсерин - предшественник фосфа-тидилэтаноламина - является липидным компонентом мембраны АТФ-й системы в клетках. [19]
Для предварительного отделения первичного экстракта липидов в настоящее время наиболее часто используется хроматография на колонках с кремниевой кислотой по методу Бергст-рема [56] и Раузера с соавт. Нейтральные липиды при этом элюируют с колонки хлороформом, гликолипиды - ацетоном, а фосфолипиды - метанолом. Позднее в некоторых, особых, случаях в него были внесены незначительные изменения. Пардон и др. [77] элюировали фосфолипиды смесью хлороформ - метанол ( 1: 9) вместо метанола. [20]
В этой системе полностью разделяются фосфатидилэтаноламин, фосфатидилсерин. Нейтральные липиды, ацилглицерины, стерины, эфиры стеринов, воска и углеводороды мигрируют с фронтом растворителя. Эта система позволяет получить разрешенные зоны фосфати-дилэтаноламина, фосфатидилглицерина, лизо-б с-фосфатидной кислоты, сфингомиелина, фосфатидилхолина и фосфатидилсе-рина вместе с фосфатидилинозитом. [21]
Этот фермент может быть также использован для дефосфорилирования фос-фатидилэтаноламина и фосфатидилсерина [630], хотя эта реакция проходит с меньшей скоростью, чем в случае фосфатидил-холина. Нейтральные липиды, получаемые из фосфолипи-дов, анализируют, как описано выше в разд. [22]
Найдено, что кислые и нейтральные липиды и фосфолипиды содержат в основном лино-левую, олеиновую и пальмитиновую к-ты. [23]
Жирорастворимые вещества древесной зелени, или липиды - это вещества, растворимые в неполярных органических растворителях. Липиды включают: смолы, нейтральные липиды ( в т.ч. углеводороды, жиры, спирты, кетоны и др. нейтральные соединения), эфирные масла, фосфолипиды, или фосфатиды ( сложные эфиры глицерина, органических кислот и фосфорной кислоты), гликолипиды ( простые эфиры Сахаров с глицерином, этерифицированными органическими кислотами), витамины А, Е, К, Д, F, каротиноиды, зеленые пигменты - производные хлорофилла. [24]
Многократное элюирование удачно выбранными системами растворителей позволяет заметно улучшить разделение гликолипидов. Во время ТСХ в первой системе мигрируют только нейтральные липиды и гликолипиды, а фосфолипиды остаются на старте. В процессе второго элюирования с пластинки вымываются нейтральные липиды, в то время как гликолипиды остаются связанными с неподвижной фазой. При использовании последней элюирующей смеси удаляются свободные жирные кислоты, мигрирующие с подвижной фазой. В этой системе нейтральные липиды имеют большую хроматографическую подвижность, чем моногексозилцер амиды, а все фосфолипиды двигаются медленнее тетрагексозилцерамидов. При использовании описанной методики удается достичь очень хорошего разделения церамидов, моногексозилцерамидов, сульфатидов, дигексозилце-рамидов, психозина, тригекоозилцерамидов, М - ацетилгексозамин-церамидотригексозидов, кардиолипина. [25]
![]() |
Состав биологических мембран. [26] |
Мембраны состоят в основном из липидов и белков. Во внутренних мембранах присутствуют в основном фосфолипиды, в плазматических содержатся и нейтральные липиды. Так, в мембранах эритроцитов 30 % липидов образует холестерин. [27]
Когда растворитель опустится до поверхности силикагеля, в колонку медленно вливают 20 мл эфир-метаноловой смеси ( 8: 1), которая вымывает нейтральные липиды, холестерин и его сложные эфиры. Оставшиеся в колонке фосфолипиды элюируют последовательно смесью хлороформа и метанола ( X - М) в отношении 9: 1, 4: 1, 3: 1, 1: 1 и метанолом. [28]
Наиболее широко используемым методом является, однако, адсорбционная хроматография ( колоночная или тонкослойная) на оксиде кремния или промытом кислотой флорисиле. Для количественной оценки используют гравиметрию или газожидкостную хроматографию входящих в состав анализируемого образца жирных кислот ( после введения внутреннего стандарта); при анализе с помощью тонкослойной хроматографии применяют также ден-ситометрию или флуориметрию. Нейтральные липиды элюируют с колонки хлороформом, гликолипиды - ацетоном, фосфолипиды - метанолом. Нейтральные липиды затем разделяют на второй колонке с оксидом кремния: углеводороды элюируют чистым гекса-ном; сложные эфиры холестерина - гексаном, содержащим 2 % эфира; триацилглицерины - гексаном с 5 % эфира; холестерин и диацилглицерины - гексаном с 15 % эфира; моноацилглицери-ны - чистым эфиром. [29]
На первой стадии разделения подвижная фаза ( гексан - эфирный раствор) поднималась по всей длине подложки-стержнк. В этих условиях нейтральные липиды разделялись, а фосфолипиды оставались практически на старте. После улетучивания растворителя разделенные нейтральные липиды детектировались на стержне с помощью прибора Ятроскан ТН-10, причем детектирование прекращали прежде, чем пламя достигало начальной зоны фосфолипидов. Для этого на заданной по длине стержня точке детектирование автоматически прекращалось и стержень извлекался из прибора. [30]