Липополисахарида

Cтраница 2

Пирогенность липополисахарида обусловлена жирными кислотами, входящими в состав липида А. [16]

Молекулы липополисахарида, вернее, их полисахарид-ные цепи, не являются жизненно необходимыми структурами для многих грамотрицательных бактерий. Эти бактерии легко диссоциируют из S - в R-формы. Вызывая интенсивный иммунный ответ на полисахаридные детерминанты LPS, бактерии как бы обманывают иммунную систему, отвлекают ее от других жизненно важных факторов. Это особенно характерно для бактерий, способных к внутриклеточному персистированию. [17]

Отделение липополисахарида от нуклеиновых кислот проводят с помощью ультрацентрифугирования: первый компонент осаждается в виде геля, а второй остается в супернатанте. В результате лиофилизации геля липополисахарид получают в виде сухого порошка. Выход 1 0 - 2 0 %, считая на вес сухих бактериальных клеток. Нуклеиновая кислота обладает более сильными кислотными свойствами, чем липополисахарид, хотя он и содержит фосфатные группы, и поэтому нуклеиновая кислота осаждается цетавлоном в первую очередь. Липополисахарид остается в растворе. [18]

Активация комплемента молекулами липополисахарида может протекать как по альтернативному, так и по классическому пути. Альтернативный путь активации поддерживается структурами полисахаридной части молекулы - классический путь активации комплемента запускает липид А. [19]

Особенно интересно, что соматические липополисахариды шероховатых штаммов ( Л - форма) также можно извлечь с помощью смеси фенол - вода [25-27], в то время как многие другие методы экстракции оказываются неэффективными. Сравнивая известные методы, удобные для экстракции 0-антигенных полисахаридных комплексов из 5-форм энтеробакте-рий [11, 12, 28] с точки зрения их применимости к Д - формам, Девис констатировал ( [23], стр. [20]

Примером может служить биосинтез липополисахарида клеточной стенки бактерий Salmonella newington, известного под названием 0-антигена. Установлено [23], что рост входящей в состав антигена макромолекулы полисахарида осуществляется с ее восстанавливающего конца. [21]

Лиофилизированный неочищенный, состоящий из липополисахарида и нуклеиновой кислоты экстракт, полученный из водной фазы после экстракции смесью фенол - вода ( методика I), растворяют в таком количестве 0 5 М раствора хлористого натрия, чтобы получить 0 5 - 1 % - ный раствор. Затем раствор постепенно разбавляют водой и отделяют осадок центрифугированием по мере того, как он образуется. Соль РНК и цетавлона осаждается приблизительно из 0 3 М раствора хлористого натрия. Разбавленный раствор лиофилизуют ( стр. После центрифугирования осадок растворяют в воде, диализуют и лиофилизуют; выход не содержащего РНК липополисахарида 30 - 40 % от неочищенного экстракта. [22]

Модель строения клеточной стенки грамотрицательных бактерий ( по Г. Шлегелю. [23]

Клеточная стенка грамположительных бактерий не содержит липополисахарида, но может включать различные белки. Содержание последних весьма вариабельно. [24]

Эндотоксины грамотрицательных бактерий, называемые также липополисахаридами ( LPS), являются важнейшими компонентами клеточной оболочки этих микроорганизмов. [25]

Супернатант, полученный на стадии центрифугирования неочищенного липополисахарида при 105000 g, помимо нуклеиновой кислоты, содержит заметное количество липополисахарида. При добавлении к супернатанту цетавлона нуклеиновая кислота осаждается, а липопо-лисахарид остается в растворе, и его можно выделить одним из приведенных выше способов. [26]

Кислые полисахариды могут присутствовать в неочищенном препарате липополисахарида, полученном экстракцией смесью вода - фенол. В этом случае на стадии ультрацентрифугирования они вместе с нуклеиновой кислотой остаются в супернатанте. Разделение кислых полисахаридов и нуклеиновых кислот основано на том, что в отличие от комплекса с нуклеиновыми кислотами комплекс цетавлона с кислыми полисахаридами растворим в 0 3 М растворе хлористого натрия. Супернатант, содержащий кислые полисахариды и нуклеиновую кислоту, растворяют в таком количестве 0 5 М раствора хлористого натрия, чтобы получился 2 % - ный раствор. К этому раствору добавляют 2 % - ный водный раствор цетавлона до прекращения выпадения осадка. Осадок комплекса цетавлона с нуклеиновыми кислотами отделяют центрифугированием. При разбавлении супернатанта водой осаждается комплекс цетавлона с кислыми полисахаридами. Этот осадок растворяют в 1 М растворе хлористого натрия ( 1 г влажного осадка на 100 мл раствора), диализуют 72 ч против воды и содержащий кислые полисахариды раствор лиофилизуют. Модифицированная методика, сходная с приведенной выше, была использована [13] для выделения и очистки кислых полисахаридов из Serratia marcescens. [27]

Липидная часть термоустойчива и отвечает за биологические эффекты липополисахарида. [28]

Другой путь получения не содержащего нуклеиновой кислоты бактериального липополисахарида возник из наблюдения [38], что экстракция смесью фенол - вода бактерий Salmonella, убитых формалином, дает водную фазу, содержащую липополисахарид и лишь небольшие количества РНК или вовсе не содержащую последней. Дальнейшие исследования показали [39], что бактериальная РНК после обработки бактерий разбавленным 0 1 - 0 5 % - ным формальдегидом больше не извлекается смесью фенол - вода ( методика I), вероятно, из-за возникновения связей между РНК и бактериальным белком, приводящим к образованию нерастворимых в смеси фенол - вода комплексов. Однако формалиновый вариант водно-фенольной экстракции нуждается в более детальном исследовании. [29]

Осадив цетавлоном нуклеиновые кислоты, можно получить остающийся липополисахарид в очищенном виде. Было найдено [17], что эта липополисахаридная фракция иногда отличается по количественному составу от первоначально осажденного липополисахарида. О 111: - S4 приготовленный по методике I, содержит 14 % 3 6-дидезокси-ь - ксилогек-созы ( колитозы, З - дезокси-ь-фукозы), тогда как липополисахарид, остающийся в надосадочной жидкости после осаждения нуклеиновой кислоты цетавлоном, содержит 27 - 28 % колитозы. [30]

Страницы: 1 2 3 4