Cтраница 4
Стенки грамотрицательных бактерий более сложные по химическому составу, в них содержится значительное количество липидов ( жиров), связанных с белками и сахарами в сложные комплексы - липопротеиды и липополисахариды. Муреина в клеточных стенках грамотрицательных бактерий в целом меньше, чем у грамположительных бактерий. Структура стенки грамотрицательных бактерий также более сложная. [46]
Другой путь получения не содержащего нуклеиновой кислоты бактериального липополисахарида возник из наблюдения [38], что экстракция смесью фенол - вода бактерий Salmonella, убитых формалином, дает водную фазу, содержащую липополисахарид и лишь небольшие количества РНК или вовсе не содержащую последней. Дальнейшие исследования показали [39], что бактериальная РНК после обработки бактерий разбавленным 0 1 - 0 5 % - ным формальдегидом больше не извлекается смесью фенол - вода ( методика I), вероятно, из-за возникновения связей между РНК и бактериальным белком, приводящим к образованию нерастворимых в смеси фенол - вода комплексов. Однако формалиновый вариант водно-фенольной экстракции нуждается в более детальном исследовании. [47]
Структура липополисахарида имеет большое диагностическое значение, поскольку разные виды или серовары патогенных гра-мотрицательных бактерий ( Salmonella typhimurium, Shigella dysenteriae и другие возбудители кишечных заболеваний) отличаются друг от друга составом боковых цепей липополисахарида внешней мембраны клеточной стенки. Незначительные различия в составе этого слоя могут быть распознаны с помощью иммунологических методов. [48]
Крахмал, гликоген, ламп-наран, инулин, нек-рые растит, слизи - энергетич. Липополисахариды бактерий и гликопротеиды пов-сти животных клеток обеспечивают специфичность межклеточного взаимод. [49]
Крахмал, гликоген, ламя-наран, инулин, нек-рые растит, слизи - энергетич. Липополисахариды бактерий и гликопротеиды пов-сти животных клеток обеспечивают специфичность межклеточного взаимод. [50]
В состав клеточной стенки грамотрицательных бактерий входит сложный липополисахарид, с которым в значительной степени связаны биологические особенности этого класса бактерий. Липополисахарид иммунологически активен ( он известен под названием О-антигена); комплекс его с белком представляет из себя эндотоксин грамотрицательных бактерий, имеющий существенное значение в процессах бактериальной инфекции. [51]
Они входят в состав различных каркасных структур оболочки бактерий. Здесь липополисахарид вступает в ассоциативные связи с некоторыми матричными белками, образуя своеобразные липид-белковые комплексы. Они формируют гексагональную решетчатую структуру. Некоторые авторы предлагают рассматривать ее как основу скелета наружной мембраны микробной клетки. [52]
Осаждение проводят следующим образом. Неочищенный липополисахарид ( 1 г) растворяют в 100 мл воды и к перемешиваемому раствору прибавляют при - 25 С 10 - 15 мл 2 % - ного водного раствора цетавлона. Через 30 мин помутневший раствор центрифугируют при 5000 g в течение 30 - 40 мин. Осадок, содержащий нуклеиновую кислоту, отбрасывают, а супернатант, который трудно упарить из-за сильного вспенивания, лиофилизуют. В полученном сухом препарате имеется примесь цетавлона, которую можно удалить двумя способами. Первый заключается в том, что препарат растворяют в 25 - 30 мл 0 5 М раствора хлористого натрия и выливают в 10-кратный объем спирта. В то время как липополисахарид выпадает в осадок, цетавлон остается в растворе. Липополисахарид отделяют центрифугированием и после проведения диализа для удаления хлористого натрия раствор лиофилизуют. Другим способом очистки липополисахарида от цетавлона является осаждение липополисахарида, растворенного в 25 - 30 мл воды, 10-кратным объемом спирта, подкисленного до рН 4 - 5 соляной кислотой. Суспензию центрифугируют, осадок тщательно промывают 90 % - ным спиртом, растворяют в воде и раствор лиофилизуют. Если липополисахарид заметно растворим в спирте, осаждение проводят ацетоном. [53]
Прежде чем приступить к изучению состава и строения выделенного липополисахарида, необходимо проверить его гомогенность. Дополнительные доказательства гомогенности липополисахарида можно получить с помощью иммунологических методов, которые, как правило, имеют большую чувствительность, чем физические методы. Химический состав липополисахаридов, выделенных из различных грамотрицатель-ных бактерий, варьируется в широких пределах. [54]
Отделение липополисахарида от нуклеиновых кислот проводят с помощью ультрацентрифугирования: первый компонент осаждается в виде геля, а второй остается в супернатанте. В результате лиофилизации геля липополисахарид получают в виде сухого порошка. Выход 1 0 - 2 0 %, считая на вес сухих бактериальных клеток. Нуклеиновая кислота обладает более сильными кислотными свойствами, чем липополисахарид, хотя он и содержит фосфатные группы, и поэтому нуклеиновая кислота осаждается цетавлоном в первую очередь. Липополисахарид остается в растворе. [55]