Матография
Cтраница 2
Хотя этот метод довольно длителен и трудоемок, ой позволяв определять непосредственно соотношение азотистых оснований; исследуемой ДНК, в то время как в других методах расчеты ГЦ или АТ-содержания основаны на косвенных данных. Метод хрс матографии на бумаге является классическим методом, в сравнени с которым можно выяснить возможности использования друга методов. [16]
 |
Блок-схема комбинированной системы с пиролизом, газовой хроматографией и масс-спектрометрическим детектированием. [17] |
Наиболее важными аналитическими методами, применяемыми совместно с газовой хроматографией, являются масс-спектромет - Vs, рия, инфракрасная спектроскопия и спектроскопия ядерного V4 магнитного резонанса. Существует сравнительно новый и много - ч обещающий комбинированный метод, объединяющий два хрома - Vj тографических метода: обычную газовую и тонкослойную хро - матографию, причем тонкослойную хроматографию рассматривают как дополнительный метод для идентификации разделенных соединений. Соответствующая система, конечно, аналогична той, в которой используются две или большее число газохроматографиче-ских колонок. [18]
Определение состава ДНК этим мето дом состоит из следующих основных этапов: выделение ДНК, ei гидролиз до азотистых оснований, разделение их с помощью хро матографии на бумаге, элюирование оснований и последующа ультрафиолетовая спектрофотометрия. [19]
Колонки с Durapak обеспечивают высокую эффективность разделения большую скорость анализа. На них достижимы скорости, ранее возможные то ко при использовании капиллярных колонок. Эффективность разделения на ] rapak не зависит от температуры и времени удерживания. Кроме того, при х матографии на Durapak получаются более симметричные пики даже для силь полярных веществ и достигается высокая воспроизводимость. Своеобразная г метрия расположения молекул жидкой фазы на поверхности носителя ( напо бие щетки) обусловливает возможность большой загрузки колонки разделяемь веществами без уменьшения эффективности разделения. [20]
Напротив, для сравнительно недорогих микроколоночных хроматографов со шприцевым насосом среднего давления и упрощенной тем самым конструкцией ( хроматографы серии Милихром и Обь) свойства растворителей, влияющие на механическую рабочу хроматографа, приобретают решающее зз ( ачепие. Токсичность, воспламеняемость, темпсрспури кипения и стоимость растворителей хв-ляются критическим моментом при выборе растворителей для препа-ратипнойи полупрепаративной ВЭЖХ, Микруколоночные хроматографы, наоборот, экономичны и относительно безопасны, благодаря малому расходу ПФ. При использовании спектрофотометрических детекторов ( СФД) безразличен показатель преломления, при регистрации хроматограмм рефрактометрическим детектором ( РМД) ипю-рируется поглощение ПФ в УФ свете. Совместимость с разбавителем ( гидрофильностъ или липофильностъ) важна при выборе режима хро матографии - НФХ или ОФХ, при составлении бинарных или многокомпонентных ПФ, при градиентном режиме элюции. Не последнее значение имеет хорошая растворимость аналитов в растворителе. Ни один индивидуальный растворитель не обладает универсальными хро-матографическими свойствами. Идеальный гипотетический растворитель для ВЭЖХ ( тепх1тит ипмета1е) должен сочетать в себе свойства нескольких растворителей совершенно различной природы. [21]
Метод хроматографии на бумаге позволил получить новые данные по химии нуклеиновых кислот, и с его помощью было изучено строение последних. Полученные за последнее время данные свидетельствуют не в пользу тетрануклеотидной гипотезы. Из нуклеиновой кислоты ферментативным расщеплением были получены полинуклеотпды ( от ди - до тетра -), которые после хроматогра-фирования давали характерные пятна на бумаге и после элюирования могли быть подвергнуты более глубокому расщеплению вплоть до мононуклеоти-дов. Применение метода фракционирования в сочетании с методами хро - - матографии и ионофореза па бумаге позволило с помощью специфических ферментов объяснить, каким образом связаны в полинуклеотидах компоненты, составляющие их основу. [22]
Очистку углеводородов проводят следующим обра: юм. Растворитель встряхивают со смссьто концентрированных серной и азотной кислот, повторяя згу операцию два-три раза; если с помощью перманганата калия в растворителе обнаружены примеси алкенов, его обрабатывают концентрированным раствором КМпО4 в 10 % - ной Н25О4 до тех пор, пока перманганат не покажет отрицательную реакцию на двойные связи. Растворитель тщательно промывают водой, высушивают над хлористым кальцием и перегоняют. Примеси любых ненасыщенных соединении удаляют, 11ро1 [ уская растворитель через колонку, заполненную активированным оксидом алюминия, Следует заметить, что этим методом нел ьзя разделить изомеры с близ-к ими температурами кипения. Различные пстролейные зфиры ( низ-кокипящис, высококипящие и др.) довольно часто используются г качестве растворителей для подготовки пробы и элюентов для хро матографии. Растворители, используемые таким образом, рскомсн дуется хранить над высушивающим агентом ( например, сульфатол кальция) и один раз перегонять перед употреблением; низкокипя щие нетролейные эфиры часто содержат высококипящие примеси которые могут загрязнять хроматографическис фракции. [23]
На рис. 90, где представлен профиль элюции с колонки, первой промывке отвечает участок А. Выход значительной порции балластных белков, очевидно, обусловлен снятием высаливающего эффекта СА. Поглощение при 280 нм здесь следует приписать самому белку, так как от свободного Тритона Х-100 колонка была очищена при первой промывке. Любопытно, что при этом на выходе колонки Тритон Х-100 не появлялся. Можно заключить, что на этом этапе элюции Тритон Х-100 связывается с сорбентом и постепенно насыщает его гидрофобную функцию, что и делает возможной последующую элюцию. Исследования с помощью радиоактивно меченного Тритона Х-100 показали, что 1 мл фенилсефарозы связывает 25 мг детергента. В работе Фабри и соавторов гидрофобная обратнофазовая хро матография была использована для очистки целых рибосом. [24]
Страницы: 1 2