Бакуловирус

Cтраница 1

Интеграция экспрессирующего плазмидного вектора в дефектный хромосомный ген HIS4 - P. pastoris. В результате кроссинговера между плазмидным геном HIS4 и геном HIS4 - клетки-хозяина происходит интеграция в геном всей плазмиды, которая оказывается фланкированной функциональным и дефектным генами HIS4. р, L и / - промотор АОХ1, кДНК бычьего лизоцима С2 и сигнал терминации транскрипции-полиадени-лирования соответственно. Черная полоска - дефектный участок в HIS4 - - rene. [1]

Бакуловирусы инфицируют только беспозвоночных, в том числе многих насекомых. В ходе инфекционного процесса образуются две их формы. Одна представлена отдельными вирио-нами, которые высвобождаются из инфицированной клетки хозяина, как правило клетки средней кишки, и способны инфицировать другие клетки этого органа. Вторая состоит из множества вирионов, заключенных в белковый мат-рикс. Белок этого матрикса называется полиэдрином, а сама структура - полиэдроном. Синтез полиэдрина начинается через 36 - 48 ч после инфекции и продолжается 4 - 5 сут, пока зараженные клетки не лизируют и хозяйский организм не погибнет. [2]

Эффект некоторых генов, введенных в бакуловирусы для повышения их инсектицидного. [3]

Бакуловирусы не оказывают свое действие мгновенно. В зависимости от условий инфицированное насекомое может погибнуть за период от нескольких дней до нескольких недель. В одном из экспериментов предполагалось использовать ген, экспрессия которого в клетках насекомого-хозяина нарушает его нормальный жизненный цикл. [4]

Бакуловирусы патогенны для многих видов насекомых, но каждый их штамм специфичен в отношении небольшого числа видов. Обычно гибель инфицированного насекомого происходит лишь спустя довольно длительное время, поэтому бакуловирусы не очень эффективны как средство контроля численности насекомых. Однако в различные штаммы бакуловирусов можно ввести специфические гены, и тогда вирус может действовать как система доставки гена, обеспечивающего синтез инсектицида в течение всего жизненного цикла вируса. Проведены предварительные испытания в лабораторных условиях, которые дали положительные результаты. Кроме того, в бакуловирус был введен ген нейротоксина, смертельного для насекомых, и были проведены полевые испытания. [5]

Схематическое представление единицы экспрессии транспортного вектора на основе бакуловирусов ( AcMNPV. Ген белка-мишени встраивают в сайт клонирования ( СК между промотором гена полиэдрина ( Рр и сайтом терминации его транскрипции ( Ft. Перед промотором и после сайта терминации транскрипции встраивают фрагменты ДНК AcMNPV ( 5 - AcMNPV ДНК и 3 - AcMNPV ДНК соответственно, обеспечивающие интеграцию единицы экспрессии в ДНК AcMNPV за счет гомологичной рекомбинации в клетках насекомого. [6]

Этот бакуловирус инфицирует более 30 других видов насекомых, а также хорошо растет в культуре многих клеточных линий. Линии клеток, обычно использующиеся для работы с рекомбинантным AcMNPV, получают из гусениц Spodopterafrugiperda. Промотор полиэдрина в этих клетках чрезвычайно активен, и при их заражении бакуловирусом дикого типа синтезируются большие количества белка. [7]

Некоторые насекомые-вредители, для контроля численности которых применяют бакуловирусы. [8]

Вирион бакуловируса имеет цилиндрический нуклеокапсид, в котором заключена его ДНК. [9]

Одно из преимуществ бакуловирусов как инструмента биоконтроля численности насекомых состоит в избирательности их действия. С одной стороны, это означает, что данный бакуловирус может использоваться для контроля численности только определенных насекомых-вредителей. Но с другой, благодаря тому что бакуловирусы эволюционировали в течение многих тысяч лет совместно со своими насекомыми-хозяевами, они научились преодолевать их защитные механизмы, а потому устойчивость к этим вирусам развивается крайне редко - гораздо реже, чем к В. Более того, устойчивые к бакуловирусам насекомые быстро утрачивают эту способность после того, как прекращают взаимодействовать с вирусами. [10]

Замещение гена полиэдрина AcMNPV единицей экспрессии транспортного вектора в результате двойного кроссинговера в 5 - и 3 -фрагментах.| Некоторые рекомбинантные белки, синтезированные в системе экспрессирующих векторов на основе бакуловирусов. HIV-1 - вирус иммунодефицита человека 1 типа. HSV - вирус простого герпеса. [11]

Исходная методика получения рекомбинантных бакуловирусов в дальнейшем была изменена по ряду причин. Во-первых, применение промотора гена полиэдрина имеет ограничения: белки, синтезирующиеся на поздней стадии литиче-ского цикла, часто оказываются модифицированными не до конца. Для решения этой проблемы промотор гена полиэдрина заменили одним из сильных промоторов AcMNPV, активно функционирующих с самого начала и до конца литического цикла. Во-вторых, линеаризация генома AcMNPV перед трансфекцией клеток насекомого увеличивает долю зон лизиса с реком-бинантными вирусами. Расщепление генома AcMNPV в одном сайте уменьшает число зон с нерекомбинантными вирусами, потому что линеаризованные геномы бакуловирусов обладают ограниченной инфицирующей способностью. В результате двойного кроссинговера между линеаризованной ДНК AcMNPV и кольцевым транспортным вектором образуется замкнутая кольцевая молекула, которая обладает инфицирующей способностью. [12]

Первый шаг в конструировании рекомбинантного бакуловируса AcMNPV состоит в создании транспортного вектора. [13]

Полиэдрин ( Polyhedrin) Белок капсида бакуловирусов; накапливается в больших количествах в ядрах пораженных клеток насекомых. [14]

Выживаемость личинок Т. ni после обработки листьев капусты бакуловирусом дикого типа или рекомбинантным бакуловирусом, экспрессирую-щим ген нейротоксина скорпиона. На контрольные растения наносили только личинок насекомых. Чем ниже выживаемость, тем больше личинок погибло и тем больше эффективность обработки. Растения обрабатывали бакуловирусами только один раз в начале эксперимента. [15]

Страницы: 1 2 3 4