Cтраница 3
Липиды, которые благодаря наличию системы сопряженных двойных связей поглощают УФ-свет, можно обнаружить в УФ-свете на слоях силика-геля Г, содержащих флуоресцирующие вещества. Гидроксил - или амино-содержащие лилиды следует хроматографировать в виде меченых радиоактивных ацетильных производных, жирные кислоты - в виде радиоактивных метиловых эфиров. Радиоактивные производные липидов локализуют методом радиоавтографии ( см. стр. [31]
Липиды, которые благодаря наличию системы сопряженных двойных связей поглощают УФ-свет, можно обнаружить в УФ-свете на слоях силика-геля Г, содержащих флуоресцирующие вещества. Гидроксил - или амино-содержащие липиды следует хроматографировать в виде меченых радиоактивных ацетильных производных, жирные кислоты - в виде радиоактивных метиловых эфиров. Радиоактивные производные липидов локализуют методом радиоавтографии ( см. стр. [32]
Простота основных операций радиоавтографирования таит в себе некоторые скрытые обстоятельства, ввиду чего должны быть изучены отдельные технические приемы. Ниже речь идет о тех операциях, которые были использованы при сравнении радиоактивных образцов при помощи радиоавтографии. Они включают способ приготовления образцов, экспозицию пленки, прояв ление, калибровку пленки и определение результатов. Такое тщательное изучение дает возможность оценить все преимущества и недостатки метода радиоавтографии. [33]
Блестящей иллюстрацией роли индикаторного метода в изучении иодирования метаболитов может служить интересная работа Мортона, Майкова, Рейнхардта и Андерсона [35], которые исследовали способность тканей крысы ( кроме щитовидной железы) связывать неорганический иодид в тироксин и дииодтирозин. Крысам, у которых удалялась щитовидная железа, спустя несколько месяцев после операции давался меченый, свободный от носителя гнеор-ганический иодид. После эксперимента крысы вскрывались и на срезах тщательно проверялась полнота удаления ткани щитовидной железы. Отсутствие тиреоидной ткани на шее и в медиастинальной области доказывалось методом радиоавтографии, и было показано, что в этих тканях не происходило захвата меченого иода ( гл. [34]
Из биологических факторов, влияющих на развитие азотобактера, следует прежде всего отметить почвенные микроорганизмы. Они могут оказывать влияние на жизнедеятельность азотобактера в почве косвенно, изменяя, например, рН или окислительно-восстановительные условия, и непосредственно, вырабатывая питательные и биологически активные вещества. Биоценоз микроорганизмов, формирующийся в условиях той или иной почвы, меняется в значительной степени под влиянием растительного покрова. И азотобактер как член биоценоза также зависит от этого фактора. С помощью метода радиоавтографии установлено, что при нанесении меченных по фосфору клеток азотобактера на семена зерновых культур клетки обычно концентрируются вокруг растущей корневой системы проростков. [35]
Идентификация искомых клонов занимает иногда много времени. Если же клонирование гена проведено, выявить сходные гены в банках кДНК относительно несложно, если применить метод Грюнштейна и Хогнесса. Затем бактериальные клетки разрушают, а высвободившуюся ДНК денатурируют. При этом онз остается связанной с фильтром. Далее на фильтр наносят радиоактивный зонд - денатурированную ДНК или РНК, которая связывается с гомологичной или частично гомологичной бактериальной ДНК - Избыток радиоактивных молекул зонда, которые не связались специфически с гомологичной ДНК, удаляют промыванием и выявляют лизированные колонии, связавшие зонд, методом радиоавтографии. [36]