Cтраница 2
Инсулин сильно агрегирован в 0 9 % - ном растворе при рН 7, но в очень разбавленных растворах при рН 2 - 3 он полностью диссоциирован. Харфенист и Крейг3 фракционировали инсулин методом противоточного распределения и показали, что кривая распределения соответствует идеальной для однородного вещества. [16]
Чтобы достичь разделения тРНК, используют незначительные различия в их физических и химических свойствах. В силу того что разные тРНК несколько отличаются друг от друга по величине коэффициента распределения между двумя несмешивающимися растворителями, для их разделения пригоден метод противоточного распределения. [17]
Метод протнвоточного распределения, основанный на принципе распределения вещества в системе жидкость - жидкость, известен с 30 - х годов. В процессе его совершенствования были разработаны: а) метод непрерывной лротивоточной экстракции, применяемый главным образом в промышленных щелях ( он лишь упоминается в этой главе), и б) метод периодического противоточного распределения. Метод противоточного распределения часто называют методом Крейга. [18]
Методы, применявшиеся раньше для очистки орсеина, оказались недостаточно эффективными. Применяя распределительную хроматографию на порошкообразной целлюлозе или на кремнеземе, удалось выделить более 12 компонентов. Метод противоточного распределения Крэйга менее пригоден для препаративного разделения, но очень ценен для установления однородности препаратов, полученных после хроматографической очистки. [19]
Метод протнвоточного распределения, основанный на принципе распределения вещества в системе жидкость - жидкость, известен с 30 - х годов. В процессе его совершенствования были разработаны: а) метод непрерывной лротивоточной экстракции, применяемый главным образом в промышленных щелях ( он лишь упоминается в этой главе), и б) метод периодического противоточного распределения. Метод противоточного распределения часто называют методом Крейга. [20]
Для полного разделения веществ с близкими константами распределения необходим аппарат с большим количеством пробирок. Для простого обогащения смеси компонентом ( например, растительным экстрактом), особенно если константы распределения компонентов не слишком схожи, достаточно небольшого-числа пробирок. Метод противоточного распределения часто-удобно использовать в качестве начальной стадии фракционирования до хроматографического разделения больших количеств веществ ( граммов и более), поскольку фракционирование при-этом проходит в мягких условиях, не вызывающих денатурации или необратимой сорбции вещества на активном сорбенте. Таким способом можно быстро обогащать большие количества смесей, пользуясь лишь обычными делительными воронками; расход растворителя при этом относительно невелик. Кроме того, за процессом обогащения или разделения можно следить с помощью тонкослойной хроматографии ( ТСХ), а результат эксперимента можно математически предсказать до его окончания. [21]
При анализе аминокислот обычно использовали повторную экстракцию бутанолом. Метод противоточного распределения является в сущности моделью хроматографии ( см. стр. Однако их число по техническим соображениям ограничивают. [22]
До последнего времени считалось, что грамицидин Грамицидин представляет собой индивидуальное соединение. Однако в 1948 г. появилась работа1902, в которой было доказано, что обычные препараты грамицидина являются смесью нескольких веществ. Путем применения метода противоточного распределения из этих препаратов были выделены две фракции, названные грамицидином А и грамицидином В. Кроме того, изучение кривых распределения показало, что имеется по меньшей мере еще две фракции, из которых пока не удалось выделить кристаллических веществ. Грамицидин В менее растворим в органических растворителях, чем грамицидин А. По своему составу эти два антибиотика очень сходны между собой. Гидролиз с последующей распределительной хроматографией на бумаге показал, что в их состав входят все те аминокислоты, которые были раньше обнаружены в нефракционированном грамицидине, а именно: валин, лейцин, триптофан, аланин и глицин. Однако эти два антибиотика отличаются друг от друга соотношением перечисленных аминокислот. [23]
Кроме того, целевой продукт может частично изомеризоваться на сорбенте, и в этом случае сорбент пришлось бы или регенерировать, или выбросить. Разделение на препаративных тонкослойных пластинках длится еще дольше я стоит еще дороже. Очевидно, что метод противоточного распределения экономически был бы еще более выгоден при наличии аппарата с большим числом пробирок и большего количества разделяемой смеси. [24]
Инсулин сильно агрегирован в 0 9 % - яом растворе при рН 7, но в очень разбавленных растворах при рН 2 - 3 он полностью диссоциирован. Молекулярный вес инсулина, определеный различными физическими методами, равен 12000, однако определение, проведенное химическим методом, показало ошибочность этой цифры. Харфенист и Крейг3 фракционировали инсулин методом противоточного распределения и показали, что кривая распределения соответствует идеальной для однородного вещества. [25]
Харуна и Акабори [21 ] выделили 35 кислых ДНФ-производных пептидов после частичного гидразинолиза овальбумина ( 20 г.), в результате обработки белка гидразином ( 100 г) при 100 в течение 3 час. В этих условиях только 0 3 моль С-концевой аминокислоты было обнаружено в свободном виде. Оказалось, что большие количества ДНФ-пептидов лучше предварительно разделять методом противоточного распределения, а затем применять хроматографию на колонках. [26]
Так как полярные группы, определяющие растворимость аминокислот, одинаковы для различных аминокислот, коэффициенты распределения аминокислот различаются незначительно, и, следовательно, их разделение становится трудной задачей. При ацетидаровании [172] или образовании пипсиль-ных производных ( / г-иодфенилсульфоншшроизводные) [94] фракционирование облегчается за счет уменьшения влияния полярных групп. Хроматографические методы значительно более эффективны по разрешающей способности, но они ограничены возможностью выделения сравнительно небольших количеств веществ. Успешное применение метода противоточного распределения зависит в значительной степени от подходящего выбора двухфазной системы растворителей. Кроме того, применение этого метода ограничивается возможностью разделения веществ низкого молекулярного веса ( 10 000), за исключением тех случаев, когда пептиды обладают большой устойчивостью к денатурации. В присутствии большинства двухфазных систем растворителей, как правило, легко происходит денатурация белков. Однако при нахождении благоприятных условий противоточное распределение-имеет преимущество по сравнению с другими методами, так как при этом возможно рассчитать коэффициенты распределения компонентов, которые могут быть установлены с большой точностью. Профиль кривой распределения дает хороший критерий чистоты вещества. [27]
Аналогичный результат был получен при введении диэтил-дисульфида морским свинкам. В трех различных системах растворителей препараты давали пятна, почти одинаковые по положению. Этот результат, был подтвержден методом противоточного распределения. [28]
Бацитрацин может быть очищен от значительного количества примесей осаждением последних из водного раствора окисью магния. Сам бацитрацин осаждают затем салициловой кислотой, с которой он образует нерастворимую в воде соль. Эту соль после промывания эфиром разлагают соляной кислотой шз. В препаратах, полученных таким путем, содержится до 80 / 0 антибиотика. Для его дальнейшей очистки был применен метод противоточного распределения, причем в качестве растворителей были использованы вторичный бутиловый спирт и 1 7 / 0-ный водный раствор уксусной кислоты. Он хорошо растворим в воде, низших спиртах ( метиловом, этиловом, изопропиловом и бутиловом) и циклогексаноле, слегка растворим в циклогексаноне, но нерастворим в эфире, хлороформе, бензоле, ацетоне и этилацетате. Бацитрацин весьма устойчив в нейтральной среде; например, его активнтсть остается неизмененной при хранении водного раствора при 0 - 5 в течение года. Бацитрацин устойчив в организме. Токсичность этого антибиотика не высока. Систематическое ежедневное введение его концентратов собакам и обезьянам не вызывает заметных изменений в морфологии крови, приводя, правда, к некоторому раздражению кожи. [29]