Метод - гель-фильтрация
Cтраница 3
 |
Двухступенчатая очистка одного из негистоновых щелочных белков хроматина тимуса ( белок АК методом гель-фильтрации на биогеле Р-60. [31] |
В этом разделе были высказаны общие соображения и приведены примеры, относящиеся к очистке и фракционированию нативных белков. Полная денатурация белков производится при оценке их молекулярной массы методом гель-фильтрации. Особенности хроматографии денатурированных белков рассмотрены ниже, в соответствующем разделе. [32]
Меченые метаболиты отделяют друг от друга и по возможности от сопутствующих соединений, которые могут помешать последующей идентификации. В зависимости от природы метаболита и отделяемых примесей после очистки методом ТСХ может потребоваться дополнительная очистка с применением методов гель-фильтрации, ВЭЖХ или ГЖХ. [33]
Поскольку реакции с участием высокомолекулярных соединений протекают сравнительно медленно, для их осуществления требуется значительный избыток реагентов. Этот избыток вместе с побочными продуктами реакции следует удалить. Метод гель-фильтрации, позволяющий осуществить групповое разделение в мягких условиях, как нельзя более подходит для этой цели. В то время как для полного отделения низкомолекулярного красителя от окрашенного белка с помощью диализа требуется 5 - 6 дней, на сефадексе G-25 или G-50 такую очистку удается осуществить менее чем за 1 час. [34]
Наряду с использованием методов фракционного растворения и осаждения в последние годы опубликован ряд статей, в которых для фракционирования целлюлозы и ее эфиров использован метод гель-фильтрации. Следует, однако, отметить, что опубликованные данные не позволяют сделать вывод о характере всей кривой МБР. Метод гель-фильтрации представляет собой пока лишь метод частичного фракционирования целлюлозы или нитрата целлюлозы. [35]
Наряду с использованием методов фракционного растворения и осаждения в последние годы опубликован ряд статей, в которых для фракционирования целлюлозы и ее эфиров использован метод гель-фильтрации. Следует, однако, отметить, что опубликованные данные не позволяют сделать вывод о характере всей кривой МБР. Метод гель-фильтрации представляет собой пока лишь метод частичного фракционирования целлюлозы или нитрата целлюлозы. [36]
Алюмосиликаты применяют для очистки и обесцвечивания растворов. Специфическую адсорбцию на силикатных сорбентах используют при анализе некоторых веществ для отделения мешающих примесей. Например, отделение липопротеида на каолине использовано перед разделением антител методом гель-фильтрации ( В u r g i п - W о 1 f A. Использование алюмосиликатов в хроматографии ограничено из-за их плохих кинетических и фильтрационных свойств и неустойчивости в кислых растворах. [37]
Метод гель-фильтрации может быть полезной заменой измерению вязкости. Для гидродинамических свойств, упомянутых ранее, объем элюирования линейного полимера в конфигурации статистического клубка является функцией длины его цепи, а следовательно, может служить мерой молекулярного веса. Если ограниченные количества материала не позволяют провести измерение вязкости, то метод гель-фильтрации может стать вполне равнозначной заменой, Если молекулярные веса, оцениваемые методом гель-фильтрации, гораздо ниже получаемых по методу седиментационного равновесия, то следует предположить, что поперечные сшивки ( например, дисульфидные связи) по-прежнему сохраняются. [38]
Метод гель-фильтрации может быть полезной заменой измерению вязкости. Для гидродинамических свойств, упомянутых ранее, объем элюирования линейного полимера в конфигурации статистического клубка является функцией длины его цепи, а следовательно, может служить мерой молекулярного веса. Если ограниченные количества материала не позволяют провести измерение вязкости, то метод гель-фильтрации может стать вполне равнозначной заменой, Если молекулярные веса, оцениваемые методом гель-фильтрации, гораздо ниже получаемых по методу седиментационного равновесия, то следует предположить, что поперечные сшивки ( например, дисульфидные связи) по-прежнему сохраняются. [39]
Сефадексы ( например, G-25 и др.) удобны для отделения из растворов белков ( ферментов) небольших молекул, в частности солей. Фракции, содержащие белок, выходят из колонки первыми и являются практически обессоленными, тогда как фракции, в которых сосредоточиваются соли, появляются позднее. Если объем раствора белка меньше / з объема колонки, то обессолива-ние его можно провести за одно пропускание через гель, причем разбавление белка относительно невелико. Применение метода гель-фильтрации быстро расширяется. Несомненно, что он имеет большое будущее. [40]
Гелеобразующее вещество, сефадекс, представляет собой гранулы поперечно сшитого декстрана. Действием эпихлоргидрина, ведущим к образованию 1 3-глицериновых мостиков, цепи декстрана связаны в трехмерную сеть с высоким содержанием гидроксильных групп. Хотя сефадекс не растворяется в воде, но будучи гидрофильным, он набухает с образованием гелеобразной структуры. Метод гель-фильтрации основан на способности набухшего геля сефадекса захватывать небольшие растворенные молекулы и не задерживать молекулы, размеры которых превышают некоторую определенную величину. [41]
Оказалось, что первый тип IgM имеет гидрофобную область, вероятно, обеспечивающую его связь с мембранами. Полезно упомянуть о том, что методом гель-фильтрации в простом варианте сортировки молекул белок иногда можно очищать не от низкомолекулярных примесей, а наоборот - от более высокомолекулярных. Именно таким способом Венерт отделил ДНК-полимеразу I от ДНК. [42]
Опыт ставится обычно следующим образом. В серию пробирок наливают различные объемы пробы, в которой требуется определить концентрацию гормона, например инсулина. Одновременно готовят пробы, содержащие известное количество этого гормона. Затем в каждую пробирку добавляют стандартное количество меченого гормона ( обычно используются гормоны, меченные 1251, испускающим у-лучи) и специфического к гормону антитела. Раствор инкубируют некоторое время ( несколько минут или часов) для достижения равновесия между гормоном ( антигеном) и комплексом антитело - гормон. Далее отделяют комплекс гормон-антитело, например, методом гель-фильтрации или осаждением сульфатом; аммония и измеряют радиоактивность полученного комплекса. Если в определяемой пробе гормон содержится в высокой концентрации, то разведение меченого гормона окажется выше, а радиоактивность комплекса гормон - антитело соответственно ниже по сравнению с пробой, где данный гормон присутствует в более низкой концентрации. Используя известные-концентрации гормона, строят стандартную кривую, с помощью которой непосредственно определяют концентрацию-гормона в исследуемой пробе. [43]
Страницы: 1 2 3