Cтраница 1
Единица ферментов ( Е) - количество фермента, которое катализирует превращение одного макромоля субстрата в минуту при заданных условиях. Если субстратом служит белок, полисахарид или молекула, в которой фермент атакует более одной связи, то вместо микромоль субстрата следует учитывать микроэквивалент затронутых реакцией групп. За меру скорости реакции принимается число расщепленных пептидных или гликозидных связей, а не общее число подвергшихся превращению молекул. [1]
Единица ферментов представляет собой абсолютную величину, позволяющую сопоставлять активность различных ферментов. Однако разные ферменты сильно различаются по активности. [2]
Рекомендуется проведение измерений единиц фермента при 25 С, оптимуме рН и концентрации субстрата, превышающей концентрацию насыщения. В этом случае скорость соответствует нулевому порядку реакции в отношении субстрата и будет зависеть только от концентрации фермента. [3]
Выражается: а) в единицах фермента на 1 мг белка или б) числом молей продукта, образовавшихся за 1 мин на 1 мг белка. Суммарная активность определяется как произведение удельной активности на общее количество фермента. [4]
Соотношение фермент-субстрат должно быть около 50 единиц фермента на 1 мг РНК или 2 единицы фермента на 1 оптическую единицу ( OD 260) РНК. Продолжительность инкубации при 37 С - ЗО мин ( Sanger etal. [5]
Удельная активность ферментного препарата выражается в единицах фермента на один миллиграмм белка. [6]
Возможен расчет активности фермента в растительных тканях в стандартных единицах фермента на 1 г веса сырых растений, а также удельной активности на 1 мг белкз. [7]
Величина V, выраженная в мкмоль-мл - - - мин -, - это число единиц вспомогательного фермента в 1 мл раствора; Ктр - константа Миха-элиса для продукта ( р) реакции, катализируемой определяемым ферментом. [8]
Амилолитическая активность характеризует способность амило-литических ферментов катализировать гидролиз крахмала до декстринов различной молекулярной массы и выражается числом единиц указанных ферментов в 1 г препарата. [9]
Адсорбцию ( иммобилизацию) гексокиназы на липосомах проводят сус-пендированием препарата липосом ( 3 мг лецитина) в 1 мЛ раствора фермента, содержащего различные количества единиц используемого фермента, а также 15 мМ MgCl2 или 5 мМ глюкозу в качестве адсорбирующих реагентов. Контрольная проба адсорбирующих реагентов не содержит. После 30-минутной инкубации при 0 С мембраны, содержащие адсорбированную гексокиназу, отделяют центрифугированием при 100 000 g в течение 1 ч и суспендируют в среде инкубации. Препарат иммобилизованной гексокиназы используют для изучения свойств в день получения. [10]
Смесь охлаждают, центрифугируют и измеряют поглощение при 260 нм ( А0260) по сравнению с контрольным образцом, приготовленным добавлением 1 мл 1Д / HCI04 к раствору РНК. Одна единица фермента за 10 мин вызывает повышение поглощения при 260 нмна 1О. Эта единица активности сравнима с используемыми в случае панкреатической и Т - - РНК-аз при определении условий полного или частичного гидролиза нуклеиновой кислоты. [11]
Из рис. 5 может быть получена кривая стандартной активности бромелина: для этого проводится касательная к кривой в ее начале, и касательная экстраполируется до того количества фермента, которое дает 0 001 миллиэквивалента тирозина. Это количество фермента определяется как одна единица протеоли-тического фермента. Затем кривая рис. 5 может быть построена таким образом, что на ординате откладывают миллиэквиваленты тирозина, а на абсциссе - единицы бромелина. [12]
Международного биохимического союза рекомендован единый условный способ выражения абсолютных количеств фермента. Содержание фермента в биологическом материале и в выделяемых ферментных препаратах может быть выражено числом единиц фермента на 1 мг веса или 1 мг белкового азота. Эта величина носит название удельной активности фермента. Сам по себе этот термин нельзя признать вполне удачным, поскольку здесь идет речь о содержании фермента в материале. [13]
Ход выделения и очистки ферментных белков контролируется чаще всего по двум основным показателям: определению активности и определению количества белка в системе. Иными словами, за ходом очистки следят по возрастанию удельной активности материала, которое выражается числом единиц фермента в 1 мг белка. [14]
Смесь выдерживают 5 мин, затем фильтруют на миллипоровом фильтре ( Millipore, 25 мм, В - б) и шесть раз промывают охлажденным 0 1М пирофосфатом натрия. Фильтр, содержащий осадок ДНК, высушивают и просчитывают в сцинтилляционном счетчике. За единицу фермента принято количество, необходимое для включения 1 нмоля 32Р за ЗО мин. Другой способ анализа, предложенный Сцекели и Сенгером ( Szekely, Sanger, 1969), отличается от описанного выше тем, что в нем в качестве субстрата вместо гидролизата нуклеиновой кислоты используют димеры. [15]