Cтраница 2
Правила, рекомендованные в 1961 г. Комиссией по ферментам, позволяют унифицировать величины, в которых выражается количество ферментов. Согласно этим правилам, за единицу любого фермента принимается то количество его, которое катализирует превращение 1 микромоля субстрата в минуту при оптимальных условиях. Удельная или специфичная активность ферментного препарата выражается числом единиц фермента на 1 мг белка, а концентрация фермента в растворе - числом единиц фермента на 1 мл. [16]
Согласно рекомендации комиссии по ферментам Международного биохимического союза за единицу активности фермента ( Е) принимают то его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоль субстрата в минуту при заданных условиях определения. Остальные условия ( рН, концентрация субстрата, кофакторов и др.) должны быть оптимальными. При бимолекулярной реакции А Б В Г за единицу фермента принимают то его количество, которое катализирует превращение 1 мкмоль А или Б, или 2 мкмоль А, если Б А, за 1 мин. Если фермент атакует более чем одну связь, например при действие на полимерную молекулу, расчет ведется на 1 мк-экв затронутых реакцией групп. [17]
Следует иметь в виду, что во-всех случаях определения ферментативного действия определяется не количество фермента, а его каталитическая активность, выражаемая тем или иным способом через скорость ферментативной реакции. Активность же фермента зависит не только от его весового количества, но, при прочих равных условиях, и от наличия или отсутствия активаторов и ингибиторов и состояния самой катализируемой реакции. Поэтому единицы ферментативного действия характеризующие активность фермента и обозначаемые часто терминами единица фермента или энзимная единица, лишь с известными оговорками могут служить мерой количества фермента. [18]
Правила, рекомендованные в 1961 г. Комиссией по ферментам, позволяют унифицировать величины, в которых выражается количество ферментов. Согласно этим правилам, за единицу любого фермента принимается то количество его, которое катализирует превращение 1 микромоля субстрата в минуту при оптимальных условиях. Удельная или специфичная активность ферментного препарата выражается числом единиц фермента на 1 мг белка, а концентрация фермента в растворе - числом единиц фермента на 1 мл. [19]
Если объем реакционной смеси не превышает 2 О мкл, то ее можно нанести на полоску ацетилцеллюлозы без дальнейшей обработки. При больших объемах смесь перед нанесением лиофилизуют и затем разбавляют водой до объема 20 мкл или менее. По-видимому, присутствие фермента заметно не изменяет подвижности олигонуклеотидов. В тех случаях, когда фермент необходимо удалить, к реакционной смеси добавляют бентонит из расчета 1 мкг на единицу фермента. Бентонит является комплексен ом как для панкреатической, так и для Т1 - РНК-азы, поэтому они будут оставаться на старте при разделении на ацетилцеллюлозе или DEAE-бумаге. [20]