Иммунологическая метода

Cтраница 2

Комплексы сывороточных белков с другими веществами белковой природы могут быть также выделены с помощью гель-хроматографии, как это было уже показано на примере комплекса гемоглобин - гапто-глобин ( фиг. В предыдущем разделе на примере инсулина были рассмотрены возможности изучения растворимых иммунокомплек-сов. Иммунологические методы в сочетании с гель-фильтрацией играют важную роль в исследовании строения у-глобулинов. Среди работ на эту тему ( см. литературу, приложение X) имеются блестящие исследования, посвященные восстановительному расщеплению и выделению L - и Н - цепей, их рекомбинации, ограниченному действию папаина и, наконец, иммунологическим свойствам интактного белка и его фрагментов. [16]

Однако иногда целлюлазы могут синтезироваться в клетках E. Поэтому часто применяют иммунологические методы детекции. Предварительно получают антитела на целлюлолитические ферменты донорного организма, и затем с их помощью проверяют наличие целлюлаз в лизатах рекомбинантных штаммов. [17]

Очистка химерного белка с помощью иммуноаффинной хроматографии. Антитела к маркерному пептиду химерного белка фиксируют на твердом носителе и пропускают через колонку химерный белок. Маркерный пептид, входящий в состав химерного белка, связывается с антителами, а все остальные белки свободно проходят через колонку. Очищенный химерный белок элюируют из колонки. [18]

Для скрининга обширных ( до 5 - 1010 клонов) библиотек комплементарных ДНК ( кДНК), кодирующих редко встречающиеся белки, были разработаны специальные системы слияния. Обычно кДНК встраивают в гены поверхностных белков ( белков филаментов или пилей) нитчатых бактериофагов ( например, М13) или бактерий и после транскрипции и трансляции получают химерные белки, входящие в состав поверхностных структур этих микроорганизмов. Здесь их идентифицируют иммунологическими методами. [19]

С этой целью используют различные модели: заражение лабораторных животных ( ботули-нический нейротоксин, стафилококковый энтеротоксин, токсины В. Кроме того, применяют иммунологические методы обнаружения токсинов ( преципитация в геле, иммунодиффузия, РОНГА, реакция обратной пассивной агглютинации латекса и др.), а также геноиндикацию специфических нуклеотидных последовательностей, кодирующих синтез токсинов. [20]

Тонкослойная гель-фильтрация сыворотки человека на сефадексе. [21]

Они показали, что эта форма не отличается от тубулярного типа с аномально высоким содержанием низкомолекулярных белков. Однако в этой области гель-фильтрация, по-видимому, уступает электрофоретическим и иммунологическим методам. То же самое можно сказать и о разделении на G-50 [30] мио-глобина и гемоглобина, поскольку для этого существуют более простые приемы, в частности высаливание. [22]

Хотя эксперименты, в которых в качестве индикаторов использовались меченные изотопами вещества, дали много ценных сведений относительно синтеза белка, тем не менее в этой области до сих пор еще остались нерешенными основные проблемы. На основании этих опытов невозможно решить, происходит ли непрерывное самообновление белков путем синтеза и последующего распада отдельных молекул белка или же оно обусловлено тем, что каждая из этих молекул, не распадаясь нацело, постоянно обменивает свои отдельные составные части. Подобный обмен может достигаться, например, путем временного размыкания пептидных связей и включения аминокислоты между концами раскрытых цепей. Для разрешения этой проблемы были использованы иммунологические методы. [23]

Образование профага вносит в клетки ряд наследуемых изменений, часто внешне абсолютно не связанных с бактериофагом. Все эти явления объединяются термином лизогенная конверсия. Сюда относятся изменения клеточной оболочки в бактериях Salmonella при образовании некоторых типов профагов. Изменения в оболочке обнаруживаются иммунологическими методами, а также сказываются в том, что лизоген-ные клетки теряют способность сорбировать фаг, который они продуцируют. Другой тип лизогенной конверсии наблюдается у Вас. У них колонии на агаре меняют свою морфологию, превращаясь из гладких в шероховатые. Последнее, как известно, связано с образованием особых продуктов жизнедеятельности - мукоидов. Следовательно, здесь налицо изменение метаболизма клетки, никак прямо не связанное с фактом лизогени-зации культуры. [24]

Этот паразит вызывает малярию, заболевание, угрожающее примерно трети всего населения Земли. Он инфицирует эритроциты и разрушает их, что приводит к развитию лихорадки, а в тяжелых случаях - к поражению мозга, почек и других органов. Чтобы выявить источники инфекции, оценить эффективность мер по их ликвидации и обеспечить раннюю диагностику и лечение, необходимы достаточно чувствительные, простые и недорогие методы. В настоящее время малярию диагностируют с помощью микроскопического исследования мазков крови - эффективного, но трудоемкого и занимающего много времени процесса. Иммунологические методы обнаружения Plasmodium, такие как ELISA, достаточно быстрые и их легко автоматизировать, но с их помощью нельзя отличить текущую инфекцию от прошедшей, поскольку при этом определяется только наличие антител к Plasmodium в крови больных. [25]

Паразит широко распространен в Латинской Америке. Он переносится клопами-хищнецами, проникает в печень, селезенку, лимфатические узлы, центральную нервную систему и, размножаясь, разрушает клетки, в которых паразитирует. Для диагностики острой формы болезни Чагаса обычно проводят микроскопическое исследование свежей пробы периферической крови. Можно использовать и другой тест, более длительный, но выявляющий паразитов с большей вероятностью. Незараженных насекомых кормят кровью пациента и через 30 - 40 сут исследуют под микроскопом их кишечник на предмет наличия паразитов. Оба метода весьма трудоемки, дорогостоящи и требуют длительного времени. Болезнь можно диагностировать и иммунологическими методами, однако они часто дают лож-ноположительные результаты. В качестве альтернативы этим менее чем удовлетворительным процедурам было разработано несколько подходов, основанных на применении ПЦР. [26]

Страницы: 1 2