Cтраница 4
Билирубин, образовавшийся в клетках системы макрофагов, называется свободным, или непрямым, билирубином, поскольку вследствие плохой растворимости в воде он легко адсорбируется на белках плазмы крови и для его определения в крови необходимо предварительное осаждение белков спиртом. После этого билирубин вступает во взаимодействие с диазореактивом Эрлиха. [46]
Диглюкуронид билирубина, в отличие от свободного билирубина, является веществом достаточно индифферентным. Он хорошо растворим в воде и дает прямую реакцию с диазореактивом. В крови при различных формах желтух обычно обнаруживаются в том или ином соотношении обе эти формы. [47]
Безбелковый экстракт после упаривания на роторном испарителе растворяют в 1 - 2 мл воды. Отбирают различные количества этого раствора, доводят водой до 2 мл, приливают 3 мл диазореактива, хорошо перемешивают и оставляют на 5 мин. Затем добавляют 3 мл 10 % - ного раствора соды, перемешивают и через 10 мин колориметри-руют при 490 нм. Следует убедиться в том, что интенсивность образующейся окраски пропорциональна количеству исследуемого раствора, взятого для определения. [48]
Затем в пробирки из бесцветного стекла объемом 25 мл наливают 0 45; 0 50 и 0 55 мл эталонного раствора и дистиллированной воды до 5 мл. В пробирку наливают 5 мл испытуемого раствора омнопона, во все пробирки добавляют по 2 мл диазореактива, а через 10 мин по 12 капель водного раствора аммиака, через 5 мин по 5 мл воды и сразу же сравнивают окраску испытуемого раствора с эталонными растворами. [49]
Предполагают, что билирубин, входящий в состав желчи, не вполне идентичен билирубину, первично образующемуся в клетках ретикуло-эндотелиальной системы. Так, билирубин, циркулирующий в незначительном количестве в крови, в норме не дает с диазореактивом Эрлиха характерного окрашивания. Поэтому такая реакция называется непрямой реакцией на билирубин. Однако при патологических состояниях, вызываемых закупоркой желчного протока, или при некоторых других нарушениях функций печени происходит застаивание желчи. Эрлиха удается без предварительной обработки спиртом. [50]
В одну микрохимическую пробирку вводят 5 капель 10 % - ного водного раствора яичного белка, в другую-5 капель 10 % - ного водного раствора желатины. В каждую из пробирок добавляют по 1 капле 10 % - ного водного раствора углекислого натрия и по 5 капель диазореактива ( диазобензолсульфоновая кислота) и встряхивают. Появление оранжевого окрашивания указывает на положительную реакцию. [51]
Перед началом практического занятия смешивают 3 мл диазореак-тива № 1, 15 мл диазореактива № 2 и доводят объем смеси дистиллированной водой до 100 мл. Колбу, содержащую рабочий Диазореактив ( смесь диазореактивов № 1 и 2), охлаждают во льду. Раствор рабочего диазореактива может сохраняться на холоду в течение суток. [52]
Готовят шкалу эталонных растворов, для чего в 30-миллилитровые пробирки из бесцветного стекла и одинакового диаметра отмеривают из микробюретки 0 34; 0 38 и 0 42 мл эталонного раствора, добавляют воды до 5 мл. В такую же пробирку вливают пипеткой 5 мл испытуемого раствора из мерной колбы. Затем во все пробирки вливают по 2 мл диазореактива, через 10 мин добавляют по 5 капель раствора аммиака и еще через 5 мин по 5 мл воды. Окраску раствора сравнивают с окраской шкалы эталонов и, если она не совпадает с окраской эталонов, готовят шкалу с иным количеством эталонного раствора. Подобрав среди эталонов окраску, сходную с окраской испытуемого раствора, находят содержание морфина в препарате. [53]